- Разное

Отзывы vivo ex: Graphiteleader Vivo EX 792ML, . GLVXS 792ML

Содержание

Обзор Graphiteleader Vivo EX — Фиш Тим Россия

Что такое удилище для спортивной ловли? Это в первую очередь надежный инструмент достижения самых высоких целей. Это спиннинг, который не заставляет задумываться о правильности выбора. Когда нет необходимости сомневаться в том, переживет ли удилище тряску в катере на огромной скорости, и обеспечит ли должный контакт с приманкой, при ловле на многометровых волнах. Когда на затянутом до упора фрикционе катушки трофейная щука не колеблясь выдергивается из коряг, благодаря мощности и безупречной работе удилища на вываживании.

Серия Graphiteleader Vivo EX – это линейка удилищ, способных обеспечить комфорт и уверенность в любых условиях. Обладая подчеркнуто мощным комлем и жесткой верхней частью, эти спиннинги отличаются прекрасным балансом, который позволяет орудовать удилищем в течение многих часов – в спорте очень важно не чувствовать усталости от работы. Великолепная тактильная чувствительность обеспечивает постоянный контакт с приманкой – и при этом дает возможность смотреть по сторонам, контролируя перемещение соперников по акватории. Жесткая вершинка обеспечивает агрессивную рывковую анимацию приманок любого типа, как глубоководного твичингового воблера, так и крупной «резины» на тяжелой джиг-головке. Выдающиеся кастинговые характеристики позволяют выполнять дальние забросы во всем диапазоне весов – даже в лодочном спорте это дает возможность существенно расширить сектор лова.

Из технических решений обращают на себя внимание три момента. Во-первых, бланки удилищ изготавливаются с применением материала Graphite Cloth LV, что обеспечивает удилищам низкий вес, увеличенный запас мощности, великолепный баланс и потрясающую чувствительность. Во-вторых, все спиннинговые удилища серии Graphiteleader Vivo EX обладают шпиготным соединением колен. Это решение было заимствовано конструкторами Graphiteleader у легендарной серии Vivo Prototype. Применение шпиготов не только позволило существенно уменьшить диаметр бланка спиннинга, но и обеспечило идеальную кривую изгиба под нагрузкой, что, в свою очередь, гарантирует полное отсутствие сходов по вине спиннинга. Третья особенность – это применение новейшего TVS катушкодержателя от Fuji на самых легких удилищах линейки. Благодаря этому не только значительно улучшилась эргономика снасти в целом, но и весьма ощутимо повысилась чувствительность спиннингов.

Все это позволяет считать Vivo EX достойным продолжением идей, воплощенных в предыдущих представителях семейства Vivo.

Благодаря широкому ряду длин и тестов, серия Graphiteleader Vivo EX позволяет без пробелов перекрыть весь востребованный диапазон по приманкам – от маленьких компактных поролонок и кастмастеров, предназначенных для прочесывания акватории, до громадных виброхвостов и крупных воблеров явной трофейной направленности.

И наконец, Graphiteleader Vivo EX – первая серия удилищ, которая маркируется знаком «PAL APPROVED», что в переводе означает «одобрено Pro Anglers League» (Лигой Профессиональных Рыболовов).

отзывы, особенности серии, популярные модели (Vivo EX, Prototype и другие)

Спиннинг Виво от Графитлидер сегодня популярен среди отечественных рыболовов. Эта линейка удилищ находит свое применение в разных направлениях ужения хищной рыбы, но наиболее востребована у любителей джиговой и твичинговой рыбалки.

Особенности серии

Серия удилищ Graphiteleader Vivo создавалась в течение года инженерами компании в тесном сотрудничестве с профессиональными спортсменами и продвинутыми рыболовами из стран СНГ. В результате конструкторам спиннингов удалось учесть и совместить максимальное количество свойств, создав инструмент, ориентированный на наши водоемы и местных представителей ихтиофауны.

Спиннинги Graphiteleader Vivo выполнены с соблюдением всех требований к качеству, которое строго контролируется на каждом этапе производства. Для удилищ применяются только новейшие материалы и высококлассные комплектующие. В результате все «палки» серии Виво обретают следующие достоинства:

  • высочайшую чувствительность;
  • минимально возможный вес;
  • идеальную балансировку;
  • повышенный прочностный ресурс;
  • приличные баллистические показатели.

Удилища Графитлидер Виво позволяют выполнять различные приемы анимации, включая рывковые. Бланк надежно вяжет рыбу, уверенно амортизирует ее рывки на вываживании, препятствуя внезапному сходу с крючка.


Graphiteleader Vivo изготавливается из высококлассных материалов

В серии Vivo представлено несколько модификаций, отличающихся направленностью и рабочими характеристиками:

  • Vivo – базовая линейка;
  • Vivo EX – мощные джиговые и универсальные «пруты»;
  • Prototype – джиговые спиннинги;
  • Nuovo – джиг, твич, лайт и универсалы.

Спиннинги из линейки Vivo относятся к премиум сегменту. Не каждый начинающий рыболов согласиться выложить кругленькую сумму за такой инструмент. Зато профессионалы и продвинутые охотники на хищную рыбу понимают, что качественный инструмент должен стоит много, потому готовы брать его.

Vivo EX

Универсальная серия спиннингов с джиговым уклоном. Отличается повышенными прочностными данными, позволяющими эксплуатировать удочку в сложных условиях, таких как коряжник либо целенаправленная охота на трофейного хищника.

В линейке Graphiteleader Vivo EX представлено девять моделей, ориентированных на «взрослую» рыбалку. Самые легкие спиннинги предназначены для приманок весом до 30 граммов. Подходят для классического джига, поводковых оснасток. Пригодны для твичинга минноу и ужения топвотерами.

Отличительной особенностью серии ЕХ является наличие четырех моделей, предназначенных для тяжелого джига и других больших приманок. Они наделены не только мощью и надежностью, но и высокими баллистическими характеристиками с приличной чувствительностью.

Читайте также:

Vivo Prototype

Спиннинги Graphiteleader Vivo Prototype – специализированная серия удилищ, разработанная для джиговой рыбалки. Эти «палки» вобрали в себя все лучшие наработки инженеров компании, выполнены из высококлассных материалов по передовым технологиям.

Серия Графитлидер Виво Прототип представлена семью моделями. Среди них одна для легкого, одна для тяжелого и пять для среднего джига. Все «пруты» имеют быстрый строй, выпускаются в длинах от 2,29 до 2,59 метра, потому подходят для лодочной и береговой ловли.

На заметку! Линейка Graphiteleader Vivo Prototype не оставит равнодушным ни одного джигита.

Каждый спиннинг Graphiteleader Vivo Prototype отличается джиговой брутальностью. При этом он сохранил изящный вид, малый вес, удобно ложится в руку рыболову. Благодаря инновационному подходу к проектированию и изготовлению удилищ, производителю удалось получить максимально чувствительный инструмент, позволяющий заметить самую робкую поклевку хищника.

Обзор лучших моделей

Среди спиннингов Graphiteleader Vivo сложно выделить самые лучшие модели, поскольку вся серия – очень качественная и полностью оправдывает все ожидания рыболовов. Ниже рассмотрим несколько инструментов для разных направлений ужения, которые можно посоветовать каждому, кто ищет толковое удилище.

702L

Универсальный лайтовый инструмент, который подойдет любому спиннингисту, увлекающемуся ужением на малых реках либо накоротке мелкими приманками на больших водоемах. Может применяться в следующих направлениях:

  • легкий джиг;
  • охота на голавля;
  • ловля вертушками и мелкими колебалками;
  • ужение попперами и волкерами.

Модель 702L хорошо балансирует с катушками размером 2500

Спиннинг Виво 702Л имеет длину 2,13 метра. Это позволяет использовать «прут» в стесненных условиях и комфортно рыбачить им с лодки. Тест бланка заявлен 1–12 граммов, но комфортно удилище начинает работать с приманок весом от 3 граммов.

762M

Спиннинг джигово-твичевой направленности, ориентированный на «взрослые» приманки. Подходит для ловли с берега и лодки. Позволяет охотиться на щуку, судака, товарного окуня, жереха, некрупного сома на водохранилищах, озерах, средних и больших реках.


Спиннинг Vivo 762М хорошо работает и с джиговыми приманками, и с минноу

Длина удилища Vivo 762М составляет 2,29 метра. Спиннинг удобно лежит в руке, качественно сбалансирован, весит всего 123 грамма. Бланк быстрого строя, отличается хорошей дальнобойностью и точностью. Тест по приманкам заявлен от 7 до 32 граммов.

EX 802HH

Самый мощный «прут» в линейке Vivo. Предназначен для хэви-джига на средних и больших реках, а также водохранилищах. Позволяет целенаправленно охотиться за трофейным судаком, щукой и сомом.

Отличается следующими характеристиками:

  • внушительная мощь;
  • высокая дальнобойность;
  • быстрый жесткий строй.

Несмотря на это, удилище мало весит, хорошо сбалансированно, обладает чувствительностью, достаточной для фиксации поклевок хищника с дальней дистанции.

Совет! Этот спиннинг позволяет целенаправленно трофейную рыбу, не боясь вываживать хищника в силовой манере.


Несмотря на внушительную мощь и ориентированность на трофейную рыбу, спиннинг позволяет заметить поклевку мелкого судачка

Длина спиннинга Графитлидер Виво модели EX 802HH составляет 2,44 метра. Тест по приманкам заявлен 25–80 граммов. Однако комфортно бланк начинает работать с весами от 40 граммов при забросе в силовом стиле, допускает незначительный перегруз.

Prototype 842M

Джиговый «прут» медиум класса, ориентированный на береговую ловлю на средних и больших реках приманками весом от 15 до 35 граммов. Его длина в 2,52 метра позволяет рыбачить и с лодки, при необходимости. Это шикарный инструмент для любого ценителя охоты на судака, щуки и увесистого окуня.

Спиннинг Graphiteleader Prototype 842M имеет быстрый строй, который позволяет выполнять достаточно дальние и точные забросы, регистрировать поклевки хищника, контролировать поведение приманки на всем протяжении проводки. На вываживание работает всем бланком, эффективно амортизируя резкие рывки рыбы.


842М отличается высочайшей тактильной сенсорикой

Представленное удилище имеет вес всего 128 граммов. Идеально сбалансировано, к нему подходят безынерционные катушки размером 2500–4000. Тест по приманкам заявлен 7–32 грамма с возможностью незначительного перегруза.

902MH

Инструмент для берегового джига, который обладает высокими баллистическими показателями и прочностным ресурсов. При этом спиннинг сохранил чувствительность, незначительный вес, качественно сбалансирован, удобно лежит в руке.

Спиннинг Graphiteleader Vivo 902MH имеет рост 2,75 метра. Тест по приманкам заявлен 9–35 граммов, но допускает перегруз. Строй бланка ближе к среднебыстрому. Масса спиннинга составляет всего 153 грамма. Лучше всего балансирует с катушками размером 3000.


Модель 902МН обладает внушительными бросковыми показателями

Кроме джига, представленная модель хорошо ведет себя с колеблющимися блеснами. Причем, спиннинг может работать и со щучьими колебалками разного типа, и с увесистыми жереховыми пилькерами. Также может применяться при ужении упористыми вертушками и кренками.

Отзывы рыбаков

Спиннинги Виво популярны среди продвинутых рыболовов, которые любят качественные и функциональные инструменты. За время использования этих «прутов» накопилось достаточно информации об их характеристиках и возможностях. Ниже приведем некоторые отзывы про серию удилищ Graphiteleader Vivo.

Сава: «Два года рыбачу прутом 6112 ML тестом от 3,5 до 15 граммов. Лучшего специализированного инструмента у меня еще не было. Спиннинг ориентирован на джиг и твичинг, но позволяет ловить вертушками и легкими колеблющимися блеснами. Удобно лежит в руке, точно бросает приманки, имеет приличный прочностной ресурс».

Щукарь: «Под твич использую спиннинг Графитлидер Виво длиной в 2,13 метра, тестом 6–24 грамма. В меру жесткий, хорошо работает с упористыми моделями минноу, ощущается запас прочности. Дополнительно могу отметить легкость прута, удобство работы с ним, высокую тактильную чувствительность».

Topalov: «Недавно увлекся тяжелым джигом. В качестве инструмента был выбран Виво от Графитлидер тестом 16–60 граммов. Учитывая рост палки, равный 2,55 метра, оно имеет следующие достоинства:
  • посылистость;
  • мощь;
  • чувствительность;
  • легкость.

Это не первый спиннинг из серии Виво в моем арсенале. Также имеется прут для лайта модели 702L. Универсал, великолепно работает со всеми типами приманок, особенно с микроколебалками, мелкоджигом, кренками. Позволяет подтвичивать минноу и проводить упористые вертушки».

СаняОк: «К спиннингу Graphiteleader Vivo пришел после десятилетнего стажа в лайтовом направлении. Искал себе толковый прут премиум уровня и взял Виво. Очень легкая, изящная, удобно лежит в руке. Позволяет ловить вертушками, воблерами, силиконом, колебалками. Имеет приличный прочностный ресурс».

Pavel: «Для берегового джига использую спиннинг Graphiteleader Vivo 902MH длиной в 2,75 метра тестом 9–35 граммов. Палка очень бросковая, отличается высочайшей чувствительностью, легкая, мощная. Четко фиксирует все поклевки и надежно просекает костистую пасть судака».

***

Спиннинг Graphiteleader Vivo – инструмент для профессионала, который хочет наслаждаться процессом ужения рыбы каждое мгновение. Изящество, мощь, чувствительность, надежность, шикарный дизайн – вот основные качества удилищ, выпускаемых под брендом Графитлидер Виво.

Vivo Y20 отзывы покупателей и специалистов на отзовик

Мобильный телефон Vivo Y20


Краткие характеристики:

Экран:6.51 «, 1600х720 (20:9), 270 ppi Память:64 ГБ, ОЗУ 4 ГБ Процессор:8 ядер(а), 1.8 ГГц Камера:3 модуля Емкость батареи:5000 мАч

Пользователям нравится:

2020 год

фаблет

≥ 3 камер

fast charge

Общая оценка: 

Мобильный телефон Vivo Y20 отзывы


Нравится

vivo y20 — нормальная рабочая лошадка. Интересный и шустрый телефон, это если сказать в двух словах. А так из положительного отмечу, то что У него стильный внешний вид, он хорошо собран, Он отлично лежит в руке, и не кажется большим. у него качественный экран, прикольная цветопередача, всё хорошо видно на солнце, при этом я включаю автоматическую регулировки яркости, и пошёл. по работе всё быстро, и шустро, нормальная аппаратная начинка, хватает для игр, и для комфортного использования в целом. также отличается длительным временем автономной работы, тут батарейка стоит на 5000 мАч, это много. поддерживает функцию бесконтактной оплаты, есть модуль nfc.

Недостатки:

Не идеальный, конечно же мне нравится то что тут микро юсб порт, вместо USB type-c,

Определенно доволен своим выбором

Смартфон быстрый, работает хорошо. скапнер отпечатков пальцев работает нормально, но мне удобнее по другому и я переключился на распознавание лиц. Для меня кстати очень удивительно, что в комплекте современного смартфона есть все необходимое — и зарядка, и чехол и даже пленка уже наклеена. Помимо прочего в смартфоне просто отличное звучание в наушниках, что большая редкость) и приятно удивлен этим моментом. Динамик сам по себе громкий, прекрасно слышно звонок всегда, вибро ощутимое. Связь телефон ловит отлично за пределами города и если еду по джпс к месту — ведет правильно, находит спутники моментом. Мне бы очень хотелось, чтобы новые телефоны не отличались очень тонким и широким дизайном,дело в том, что слишком широкие смартфоны держать одной рукой просто неудобно. Но в виво в плане эргономики полный порядок, он какой-то вытянутый, удобно пользоваться как ни странно, даже сообщение набирать

Недостатки:

все ок

Доволен

Телефон выдали в офисе в качестве рабочего, в принципе хороший и обычный телефон, на базе android, с Fantach оболочкой. тут Наверное первым делом был критерии выбора автономность, у него емкий аккумулятор, на 5000 миллиампер часов у него нормально снимает камера, чтобы делать фотки документов, либо сидеть в Google документах, удобно. и в принципе для удобства всё предусмотрено, у него сбоку находится сканер отпечатка пальца, снимается быстро HD картинка, сочная, насыщенная, и довольно четкая. поддерживает две sim-карты, что в нашем случае актуально памяти пока хватает, плюс есть облако, поэтому не думаю что мне придется вставлять сюда Micro SD карту и по дизайну, прикольно смотрится весь такой светлый, на Свету задняя крышка переливается, даже в бампере

Недостатки:

не выявил

в плане производительности и скорости работы телефон ожидаемо хороший. да здесь всего 4 ГБ оперативной памяти но я не увлекаюсь играми. Он мне в первую очередь нужен для рабочих задач и Когда я открываю много приложений в фоне или штук 20 вкладок, как он переключается между всеми ними плавно без дерганий подвисаний. честно сказать ожидала намного меньшего телефона за такую стоимость и для себя уже решил Если вдруг разобью или ещё что-то обязательно куплю такой же или просто поновее

Сканер отпечатков пальцев на боковой грани просто Отличный вариант поскольку в коем-то веке телефон мне не нужна перехватывать чтобы дотянуться сзади на крышке до сканера Это так удобно!!!!

Недостатки:

нет

Оставьте свой отзыв на Vivo Y20

Оставить отзыв

Спасибо за отзыв. 

Он будет опубликован после проверки модератором!

Характеристики Vivo Y20


Все отзывы взяты из открытых источников, либо оставлены посетителями сайта. Администрация сайта otzovik-top ответственности за отзывы не несет.

VEV: Viva Ex Vivo — дата выхода, отзывы

Платформа:

Дата релиза: 17 мая 2016 года

В VEV: Viva Ex Vivo вы управляете искусственным наноорганизмом, которому предстоит выжить в различных микроскопических средах обитания. Путешествуя в капле воды или крови, вы должны будете собирать ценные органические частицы и избегать встречи с хищными организмами. Ваша главная цель – собрать максимальное количество потенциальной энергии и продержаться как можно дольше в живом состоянии.

Достижения +9 

Игровые новoсти

На этой странице представлена общая информация по игре VEV: Viva Ex Vivo. По мере появления информации о проекте, на данной странице можно будет найти новости, видео, скриншоты, обои, арты, интервью с разработчиками, статьи, превью, обзор, советы в прохождении и многое другое. Возможно, вы попали на эту страницу, так как хотите скачать torrent VEV: Viva Ex Vivo без регистрации или бесплатно скачать VEV: Viva Ex Vivo на большой скорости. Портал Gamer-Info предоставляет информацию об играх, а ссылки на бесплатное скачивание VEV: Viva Ex Vivo вы сможете найти на других ресурсах. Помогите другим больше узнать о проекте, оставьте отзыв о VEV: Viva Ex Vivo, поставьте оценку или просто поделитесь страничкой игры в социальных сетях.

Если вы нашли ошибку в описании или датах релизов VEV: Viva Ex Vivo на нашем портале, воспользуйтесь специальной функцией (знак восклицания справа от страницы) отправки сообщения редактору портала. Все заявки рассматриваются редакторами и нужные коррективы будут внесены в базу в ближайшее время.

Представленные в базе трейлеры VEV: Viva Ex Vivo можно скачать бесплатно на большой скорости по прямым ссылкам. Ссылки на бесплатную загрузку видео становятся доступны после регистрации.

Вы также можете найти прохождение VEV: Viva Ex Vivo, которое поможет сберечь нервы и время в поисках нужного переключателя или запрятанного в недрах локаций ключа. Прохождение также будет полезно тем, кто любит найти все секреты и собрать достижения. Если игра на английском, а вы плохо им владеете, то вам пригодится возможность скачать руссификатор VEV: Viva Ex Vivo бесплатно без регистрации. Руссификаторы к некоторым играм содержат русскую озвучку, но в большей части случаев это просто субтитры. На страницах нашего портала также представлены коды к игре VEV: Viva Ex Vivo, помогающие пройти даже самых сложных боссов.

Спиннинг Graphiteleader Aspro GAPS-862М (259 7-28)

Кренк 664 Новосибирск

17 апреля 2019, 20:10

Оценка 9 Опыт использования: несколько месяцев

Так уж получилось, что одновременно в моем арсенале было три спиннинга одного производителя , в одном тесте и практически в одной длине, но в разных ценовых категориях, это Graphiteleader Aspro GAPS-862М , VIVO EX 842М и RIVOLTA 852М. Правда Риволта уже продана и ждет когда ее заберет новый хозяин, VIVO EX выставлена на продажу, а Aspro является действующим инструментом. Отзыв о Aspro хотел бы составить в форме сравнения этих трех палок, ну и для себя ответить на вопрос » Действительно ли Aspro настолько лучше ,на сколько дороже чем VIVO EX и RIVOLTA ????»
Сразу хочу сказать, что все три спиннинга мне понравились и я не разу не пожалел об их покупке.
Дальность заброса: Все три спиннинга очень дальнобойные, что по джигу, что по воблерам ,но на первое место я бы поставил Аспро, немного ему проигрывает Ривольта и еще чуть ближе бросает Виво ЕХ (все это в моих руках,у другого бросающего мнение может быть другое)
Удобство заброса: Здесь однозначный лидер Аспро, палка реально кидает сама, второе место VIVO EX-в заброс нужно «въехать», правда через десяток бросков все становиться понятно и удобно, третье место Револьта, тут нужно вложиться,зато при должном усилии приманка улетает за горизонт.
Работа на вываживании: Все три палки очень достойно вяжут рыбу, но все таки Аспро однозначно это делает лучше, Виво ЕХ и Револьта то же хороши,но у них так же очень важна правильная настройка фрикциона.
Мощность и запас прочности: Что Аспро, что Виво ЕХ с Револьтой палки быстрые, довольно таки злые, судака просекают отлично, не валятся на Обском течении. Наиболее мощным комлем по моему мнению обладает Виво ЕХ, на втором месте Аспро,третья Револьта. Зато у Револьты можно немного превысить тест по приманкам, в этом плане она лидер, у Аспро и Виво тесты по верху указаны максимально честно и превышать их я бы не рекомендовал.
Чуйка: Вот тут я был немного разочарован. Начитавшись отзывов о «стуках в руку, которые отдают в бедро» о том как люди чувствуют каждую травинку и камушек » , о суперской системе OSS, лично я ждал от Аспро большего…Да тактильная и визуальная чувствительность на очень достойном уровне, но не так уж и сильно отличается от Виво ЕХ и Револьты. В общем по моим ощущениям чуйка у Аспро выше , но не в разы, она на первом месте, вторая Виво, третья Револьта.
Баланс и удобство в работе: Вот тут Аспро вне конкуренции, легкая , сбалансированная, очень удобная, рыбачить ей одно удовольствие. Второе место заслуженно у Виво ЕХ,то же довольно таки легкая палка с отличным балансом. В этих компонентах Револьта конечно уступает и Аспро и Виво ЕХ, она заметно тяжелее, баланс смещен к кончику, тут без вариантов третье место.
Внешний вид, качество сборки и чехол:
Все три спиннинга внешне чем то похожи друг на друга, дизайн довольно таки простой , без изысков , но мне такой и нравится. Качество сборки,не смотря на то ,что Виво ЕХ и Револьта сделаны в Китае,а Аспро в Японии на очень высоком уровне, можно сказать безупречное. В общем в этих аспектах палки равны, а вот чехол у Аспро жутко не удобный, дурацкий, так до сих пор и не могу к нему привыкнуть.
Вывод: Все три спиннинга очень достойные палки. Однозначно Аспро более классный инструмент,он лучше практически во всех показателях, Виво ЕХ заслуженно второй, Ривольта третье место. Но вот что касается цены-мое мнение такое: не настолько Аспро лучше ВивоЕХ на сколько дороже стоит. Не на столько Виво ЕХ лучше Ривольты на сколько дороже стоит. Ну и наконец не на столько Револьта хуже Аспры и Вивы насколько она дешевле…
Достоинства:
Легкая, отличный баланс, очень дальнобойная,хорошая чуйка
Недостатки:
Цена!!!!

Viva Beach Otel 3* (Турция/Средиземноморский регион/Аланья/Махмутлар). Отзывы отеля. Рейтинг отелей и гостиниц мира

Был в отеле  в июне 2019  В одиночку

Не рекомендую

на тройку потянет

тянет на тройку, питание курица и овощи и куча разных салатов, рыбы нет. голодным никогда не был. В целом как и везде, рядом с морем , в номерах на 6-м этаже нет кондиционера, иногда перебои с водой , холодильников в номере нет , воду не дают. В принципе все понимают по русски. дадите доллар на чай уборщикам уберут номер без проблем А ТЕПЕРЬ МИНУС…ЭТО БАР… из напитков разбавленная водка ,…

1862086 оценил сервисы

2.3

2 размещение

2 сервис

3 питание

3.0 Инфраструктура отеля

4.0 Безопасность в отеле

3.0 Благоустройство территории

1.0 Рестораны и бары

4.0 Удобная парковка

3.2 Качество сервисов и обслуживания

4.0 Анимация

4.0 Вежливый и внимательный персонал

3.0 Работа ресепшен

2.0 Скорость и качество интернет соединения(WiFi)

2.5 Номера

3.0 Звукоизоляция в номере

2.0 Качество мебели, сантехники

2.0 Кондиционирование номеров

3.0 Уборка номеров

3.2 Пляж

3.0 Инфраструктура пляжа

3.0 Комфортное число отдыхающих

3.0 Удобный вход в море

4.0 Чистота на пляже

2.7 Подходит для отдыха

3.0 Деловая поездка

3.0 Если нужно только переночевать

3.0 Парой

3.0 С друзьями

3.0 Семейный с детьми

2.0 Спокойный

2.0 Тусовочный

2.7 Сервисы для детей

4.0 Детская анимация

2.0 Инфраструктура для детей

2.0 Питание для детей

3.8 Удобство расположения

3.0 Где развлечься — ночные клубы, кино, т.д.

5.0 Кафе, рестораны, магазины

3.0 По отношению к достопримечательностям

4.0 По отношению к пляжу

«Эксперт»: последние новости России сегодня

Оператор с голливудским бэкграундом — о своем первом режиссерском опыте, о том, что мешает русским актерам становиться мировыми звездами и кто был прав в конфликте Рерберга и Тарковского

№40

Продажи автомобилей в России опять начали сокращаться. Но уже не из-за падения спроса, а из-за растущего дефицита автомобилей: автопроизводители вынуждены останавливать конвейеры из-за нехватки чипов и других запчастей

№40

Вопреки производственным перебоям и дефициту комплектующих мировые автопроизводители продолжают обновлять модельный ряд для России, целясь в наиболее перспективные рыночные ниши

№40

27 сентября 2021, 00:00

В России начались продажи четвертого поколения городского кроссовера Hyundai Tucson. Новинка отличается броским дизайном, выполненным в фирменной стилистике «параметрической динамики», машина доступна в восьми цветах кузова, которые можно комбинировать с одним из двух цветов интерьера

№40 EPA

Бывший президент Грузии Михаил Саакашвили прибыл в Грузию и практически сразу же был арестован. И вопрос теперь в том, почему ему так захотелось попасть за решетку

Zuma\TASS

Новому лекарству против коронавируса предсказывают большое будущее и многомиллиардные контракты

PA 1 октября 2021, 12:42 Сергей Мануков

Очень холодная зима 2021-22 годов спровоцирует хаос на всех рынках, начиная от топливного и заканчивая продовольственным, и вполне может превратить нынешний энергетический кризис в глобальный экономический кризис, считает Bloomberg

«БЕДУШ & МАРЕННИКОВА»

27 сентября 2021, 00:00

Гала-концерт «Галина Уланова. Далекая близкая звезда» состоится 11 октября в Государственном Кремлевском дворце в рамках проекта «Автографы и имиджи»

№40 ПРЕСС-СЛУЖБА ФЕСТИВАЛЯ

27 сентября 2021, 00:00

Московские показы кинофестиваля «Китай, ХХ век. История глазами китайского кино» начнутся 2 октября в Инженерном корпусе Третьяковской галереи и продлятся до 8 октября

№40 ГМИИ ИМЕНИ А. С. ПУШКИНА

27 сентября 2021, 00:00

В Галерее искусства стран Европы и Америки XIX–XX веков ГМИИ имени А. С. Пушкина 28 сентября откроется выставка «Ксения Хауснер

№40 ИРА ПОЛЯРНАЯ

27 сентября 2021, 00:00

На основной сцене Театра Наций 10, 11, 23 и 24 октября пройдет премьера спектакля Константина Богомолова «На всякого мудреца»

№40 27 сентября 2021, 00:00 Владислав Сурков

В шорт-листе премии «Просветитель» — текст о происхождении системы животного мира

№40 Коллаж: Тамара Ларина

За сентябрь курс рубля к доллару практически не изменился, в то время как к корзине твердых валют (DXY), американец вырос более чем на 2%. Эксперты рассказали, что будет происходить с российским рублем в октябре

Коллаж: Тамара Ларина

Фокус приложения политических, экономических и военных усилий США сдвигается на индо-тихоокеанский регион. Однако часть европейских элит, американских политиков и военных настаивают на «сдерживании» России на восточном фланге НАТО

Zuma\TASS

Николя Саркози приговорен к году лишения свободы за незаконное финансирование своей избирательной кампании 2012 года. Но этим злоключения экс-президента Франции не ограничатся. Впереди – самое опасное для него дело: о предполагаемом финансировании его избрания Муаммаром Каддафи

AP/TASS

Пекин готов покупать энергоносители за любые деньги и тем самым сделать ситуацию с газом и электроэнергией в Старом Свете еще хуже

Коллаж: Тамара Ларина 1 октября 2021, 12:07 Анна Королева

ЦБ РФ ужесточил требования к банкам, выдающим необеспеченные потребительские займы

Космический мусор может привести к глобальной катастрофе в результате моментальной потери всей связи на Земле. Избежать этого можно только в результате кооперации России, США и Китая

№40 FREDRIK VON ERICHSEN- DPA/TASS

Что думают француженки из стран Магриба об успехах мультикультурализма, о дискриминации, будущем Европы. И почему политики Пятой республики — это kiff-kiff

№40 Коллаж: Тамара Ларина

По претензиям российского ведомства социальной сети грозит штраф размером больше миллиарда

Митя Алешковский/ТАСС

Московские власти хотят штрафовать «шумные» автомобили и мотоциклы в автоматическом режиме. Специальные камеры для этого уже придумали. Но, как всегда, есть нюанс. Даже два

Самообновление гемопоэтических стволовых клеток in vivo и ex vivo

  • 1.

    Оркин С. Х. и Зон Л. И. Гематопоэз: развивающаяся парадигма биологии стволовых клеток. Cell 132 , 631–644 (2008).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 2.

    Гордон М. Ю., Льюис Дж. Л. и Марли С. Б. О мышах и людях… и слонах. Кровь 100 , 4679–4680 (2002).

    CAS PubMed Google ученый

  • 3.

    Ивз, К. Дж. Гематопоэтические стволовые клетки: концепции, определения и новая реальность. Кровь 125 , 2605–2613 (2015).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 4.

    Weissman, I. L. & Shizuru, J. A. Истоки идентификации и выделения гемопоэтических стволовых клеток и их способность вызывать специфическую для доноров толерантность к трансплантации и лечить аутоиммунные заболевания. Кровь 112 , 3543–3553 (2008).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 5.

    Сейта, Дж. И Вайсман, И. Л. Гематопоэтические стволовые клетки: самообновление против дифференцировки. Wiley междисциплинарный. Rev. Syst. Биол. Med. 2 , 640–653 (2010).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 6.

    Копелан, Э.А. Трансплантация гемопоэтических стволовых клеток. N. Engl. J. Med. 354 , 1813–1826 (2006 г.).

    CAS PubMed Google ученый

  • 7.

    Chabannon, C. et al. Трансплантация гемопоэтических стволовых клеток в возрасте 60 лет: платформа для клеточной терапии. Sci. Пер. Med. 10 , eaap9630 (2018).

    PubMed Google ученый

  • 8.

    Pinho, S. & Frenette, P. S. Активность гемопоэтических стволовых клеток и взаимодействие с нишей. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 20 , 303–320 (2019).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 9.

    Spangrude, G.J., Heimfeld, S. & Weissman, I.L. Очистка и характеристика гемопоэтических стволовых клеток мыши. Science 241 , 58–62 (1988).

    CAS PubMed Google ученый

  • 10.

    Виссер, Дж. У., Бауман, Дж. Г., Малдер, А. Х., Элиасон, Дж. Ф. и де Лиу, А. М. Выделение плюрипотентных гемопоэтических стволовых клеток мыши. J. Exp. Med. 159 , 1576–1590 (1984).

    CAS PubMed Google ученый

  • 11.

    Kiel, M.J., Yilmaz, O.H., Iwashita, T., Terhorst, C. & Morrison, S.J. Рецепторы семейства SLAM различают гематопоэтические стволовые клетки и клетки-предшественники и выявляют эндотелиальные ниши для стволовых клеток. Cell 121 , 1109–1121 (2005).

    CAS PubMed Google ученый

  • 12.

    Морита Й., Эма Х. и Накаучи Х. Гетерогенность и иерархия внутри самого примитивного компартмента гемопоэтических стволовых клеток. J. Exp. Med. 207 , 1173–1182 (2010).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 13.

    Ямамото, Р.и другие. Клональный анализ открывает самообновляющиеся предшественники с ограниченным клонированием, полученные непосредственно из гемопоэтических стволовых клеток. Cell 154 , 1112–1126 (2013).

    CAS PubMed Google ученый

  • 14.

    Balazs, A. B., Fabian, A. J., Esmon, C. T. и Mulligan, R. C. Рецептор эндотелиального протеина C (CD201) явно идентифицирует гемопоэтические стволовые клетки в костном мозге мышей. Кровь 107 , 2317–2321 (2006).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 15.

    Gazit, R. et al. Fgd5 идентифицирует гемопоэтические стволовые клетки в костном мозге мышей. J. Exp. Med. 211 , 1315–1331 (2014).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 16.

    Chen, J. Y. et al. Hoxb5 маркирует долговременные гематопоэтические стволовые клетки и выявляет гомогенную периваскулярную нишу. Природа 530 , 223–227 (2016).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 17.

    Kataoka, K. et al. Evi1 необходим для самообновления гемопоэтических стволовых клеток, и его экспрессия маркирует гемопоэтические клетки с долговременной мультиклинейной репопуляционной активностью. J. Exp. Med. 208 , 2403–2416 (2011).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 18.

    Acar, M. et al. Глубокая визуализация костного мозга показывает, что неделящиеся стволовые клетки в основном перисинусоидальны. Природа 526 , 126–130 (2015).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 19.

    Tajima, Y. et al. Непрерывное поступление клеток из гематопоэтических стволовых клеток, экспрессирующих Krt7, во время нативного гематопоэза, выявленное с помощью метода таргетного переноса генов in vivo. Sci. Отчет 7 , 40684 (2017).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 20.

    Notta, F. et al. Выделение единичных гемопоэтических стволовых клеток человека, способных к долгосрочному многолинейному приживлению. Наука 333 , 218–221 (2011). В этой статье описывается использование экспрессии CD49f для очистки человеческих HSC на высоких частотах .

    CAS PubMed Google ученый

  • 21.

    Wilson, N.K. et al. Комбинированный анализ функциональных характеристик отдельных клеток и экспрессии генов решает проблему неоднородности популяций стволовых клеток. Cell Stem Cell 16 , 712–724 (2015).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 22.

    Notta, F. et al. Четкие пути развития клонов меняют иерархию крови человека в онтогенезе. Наука 351 , aab2116 (2016).

    PubMed Google ученый

  • 23.

    Wilkinson, A.C. et al. Долгосрочная экспансия гематопоэтических стволовых клеток ex vivo позволяет проводить безусловную трансплантацию. Природа 571 , 117–121 (2019). В этой статье описывается система долгосрочной экспансии ex vivo культивирования для мышиных HSC с использованием PVA .

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 24.

    Fares, I. et al. Экспрессия EPCR отмечает CD34, расширенный UM171. Кровь 129 , 3344–3351 (2017).

    CAS PubMed Google ученый

  • 25.

    Tomellini, E. et al. Интегрин-α3 является функциональным маркером увеличенных ex vivo долгосрочных гемопоэтических стволовых клеток человека. Cell Rep. 28 , 1063–1073 (2019).

    CAS PubMed Google ученый

  • 26.

    Till, J. E. & McCulloch, E. A. Прямое измерение радиационной чувствительности нормальных клеток костного мозга мыши. Radiat. Res. 14 , 213–222 (1961).

    CAS PubMed Google ученый

  • 27.

    Becker, A. J., McCulloch, E. A. и Till, J. E. Цитологическая демонстрация клональной природы колоний селезенки, полученных из трансплантированных клеток костного мозга мыши. Nature 197 , 452–454 (1963).

    CAS PubMed Google ученый

  • 28.

    Szilvassy, ​​S.J., Humphries, R.K., Lansdorp, P.M., Eaves, A.C. & Eaves, C.J. Количественный анализ тотипотентного восстановления гемопоэтических стволовых клеток с помощью стратегии конкурентной репопуляции. Proc. Natl Acad. Sci. США 87 , 8736–8740 (1990).

    CAS PubMed Google ученый

  • 29.

    Лемишка, И. Р., Раулет, Д. Х. и Маллиган, Р. С. Потенциал развития и динамическое поведение гемопоэтических стволовых клеток. Cell 45 , 917–927 (1986).

    CAS PubMed Google ученый

  • 30.

    Osawa, M., Hanada, K., Hamada, H. & Nakauchi, H. Долгосрочное лимфогематопоэтическое восстановление одной гемопоэтической стволовой клеткой с низким / отрицательным CD34. Наука 273 , 242–245 (1996). В этой статье описывается использование анализов трансплантации одиночных клеток для выявления самообновляющихся мультипотентных HSC в костном мозге мыши .

    CAS PubMed Google ученый

  • 31.

    Waterstrat, A., Liang, Y., Swiderski, C.F., Shelton, B.J. и Van Zant, G. Конгенный интервал конгенных мышей CD45 / Ly-5 содержит несколько генов, которые могут влиять на приживление гемопоэтических стволовых клеток. Кровь 115 , 408–417 (2010).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 32.

    Mercier, F. E., Sykes, D. B. и Scadden, D. T. Мутация единственного целевого экзона создает настоящую конгенную мышь для конкурентной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток: мышь C57BL / 6-CD45.1 STEM . Stem Cell Rep. 6 , 985–992 (2016).

    CAS Google ученый

  • 33.

    Yamamoto, R. et al. Крупномасштабный клональный анализ решает проблему старения компартмента гемопоэтических стволовых клеток мыши. Cell Stem Cell 22 , 600–607 (2018).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 34.

    Carrelha, J. et al. Иерархически связанные судьбы мультипотентных гемопоэтических стволовых клеток. Природа 554 , 106–111 (2018). В этой статье приводятся убедительные доказательства существования самообновляющихся стволовых клеток с ограничением тромбоцитов .

    CAS PubMed Google ученый

  • 35.

    Haas, S. et al. Вызванный воспалением экстренный мегакариопоэз, управляемый гематопоэтическими стволовыми клетками-предшественниками мегакариоцитов. Cell Stem Cell 17 , 422–434 (2015).

    CAS PubMed Google ученый

  • 36.

    Benveniste, P. et al. Промежуточные гемопоэтические стволовые клетки с расширенным, но ограниченным по времени потенциалом восстановления. Cell Stem Cell 6 , 48–58 (2010).

    CAS PubMed Google ученый

  • 37.

    Ямамото, Р., Уилкинсон, А. К. и Накаучи, Х. Изменение представлений о гемопоэтических стволовых клетках. Наука 362 , 895–896 (2018).

    CAS PubMed Google ученый

  • 38.

    Эма, Х., Такано, Х., Судо, К. и Накаучи, Х. Самовосстанавливающееся деление гемопоэтических стволовых клеток in vitro. J. Exp. Med. 192 , 1281–1288 (2000).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 39.

    Gerrits, A. et al. Инструмент клеточного штрих-кодирования для клонального анализа кроветворной системы. Кровь 115 , 2610–2618 (2010).

    CAS PubMed Google ученый

  • 40.

    Лу, Р., Нефф, Н. Ф., Тектон, С. Р.И Вайсман, И. Л. Отслеживание отдельных гемопоэтических стволовых клеток in vivo с использованием высокопроизводительного секвенирования в сочетании с вирусным генетическим штрих-кодированием. Nat. Biotechnol. 29 , 928–933 (2011).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 41.

    Naik, S.H. et al. Разнообразный наследственный импринтинг ранних гематопоэтических предков. Природа 496 , 229–232 (2013).

    CAS PubMed Google ученый

  • 42.

    Sun, J. et al. Клональная динамика нативного кроветворения. Природа 514 , 322–327 (2014). В этой статье описывается использование Sleeping Beauty на основе транспозонов для штрих-кодирования HSC и HPC in vivo .

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 43.

    Busch, K. et al. Основные свойства невозмущенного кроветворения из стволовых клеток in vivo. Природа 518 , 542–546 (2015).

    CAS PubMed Google ученый

  • 44.

    Брэдфорд, Г. Б., Уильямс, Б., Росси, Р. и Бертончелло, И. Покой, цикличность и обмен в компартменте примитивных гемопоэтических стволовых клеток. Exp. Гематол. 25 , 445–453 (1997).

    CAS PubMed Google ученый

  • 45.

    Cheshier, S.H., Morrison, S.J., Liao, X. & Weissman, I.L. Кинетика пролиферации in vivo и клеточного цикла долгосрочных самообновляющихся гемопоэтических стволовых клеток. Proc. Natl Acad. Sci. США 96 , 3120–3125 (1999).

    CAS PubMed Google ученый

  • 46.

    Судо К., Эма Х., Морита Ю. и Накаучи Х. Возрастные характеристики гемопоэтических стволовых клеток мыши. J. Exp. Med. 192 , 1273–1280 (2000).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 47.

    Wilson, A. et al. Гемопоэтические стволовые клетки обратимо переходят из состояния покоя в самообновление во время гомеостаза и восстановления. Cell 135 , 1118–1129 (2008).

    CAS PubMed Google ученый

  • 48.

    Yu, V. W. C. et al. Эпигенетическая память лежит в основе клеточно-автономного гетерогенного поведения гемопоэтических стволовых клеток. Cell 168 , 944–945 (2017).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 49.

    Ganuza, M. et al. Глобальная клональная сложность системы крови мыши снижается на протяжении жизни и после серийной трансплантации. Кровь 133 , 1927–1942 (2019).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 50.

    Берниц, Дж. М., Ким, Х. С., Макартур, Б., Зибург, Х. и Мур, К. Гематопоэтические стволовые клетки подсчитывают и запоминают самообновляющиеся деления. Cell 167 , 1296–1309 (2016).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 51.

    Pei, W. et al. Штрих-кодирование полилокса показывает судьбу гемопоэтических стволовых клеток, реализуемую in vivo. Природа 548 , 456–460 (2017). В этой статье описывается разработка и валидация системы штрих-кодов in vivo Polylox , которая позволяет штрих-кодировать и отслеживать многочисленные HSC во время нативного гематопоэза .

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 52.

    Frieda, K. L. et al. Синтетическая запись и считывание на месте информации о происхождении в отдельных клетках. Природа 541 , 107–111 (2017).

    CAS PubMed Google ученый

  • 53.

    Loeffler, D. et al. Асимметричное наследование лизосом предсказывает активацию гемопоэтических стволовых клеток. Nature 573 , 426–429 (2019).

    CAS PubMed Google ученый

  • 54.

    Christodoulou, C. et al. Визуализация естественных гемопоэтических стволовых клеток и клеток-предшественников на живых животных. Природа 578 , 278–283 (2020).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 55.

    Камель-Рейд, С. и Дик, Дж. Э. Приживление иммунодефицитных мышей гемопоэтическими стволовыми клетками человека. Наука 242 , 1706–1709 (1988).

    CAS PubMed Google ученый

  • 56.

    Goyama, S., Wunderlich, M. & Mulloy, J. C. Модели ксенотрансплантатов для нормальных и злокачественных стволовых клеток. Кровь 125 , 2630–2640 (2015).

    CAS PubMed Google ученый

  • 57.

    Юрино А.А. и др. Улучшенное восстановление человеческого эритропоэза и тромбопоэза в модели мыши с иммунодефицитом с мутациями Kit Wv . Stem Cell Rep. 7 , 425–438 (2016).

    CAS Google ученый

  • 58.

    Rahmig, S. et al. Улучшение эритропоэза человека и образования тромбоцитов у гуманизированных мышей NSGW41. Stem Cell Rep. 7 , 591–601 (2016).

    CAS Google ученый

  • 59.

    Miller, P.H. et al. Анализ параметров, которые влияют на выход человеческих гемопоэтических клеток у мутантных c-kit-иммунодефицитных мышей. Exp. Гематол. 48 , 41–49 (2017).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 60.

    Takagi, S. et al. Связанный с мембраной человеческий SCF / KL способствует in vivo приживлению кроветворения человека и дифференцировке миелоида. Кровь 119 , 2768–2777 (2012).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 61.

    Biasco, L. et al. In vivo отслеживание гематопоэза человека выявляет закономерности клональной динамики во время ранней и стабильной фаз восстановления. Cell Stem Cell 19 , 107–119 (2016).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 62.

    Scala, S. et al. Динамика генно-инженерных гемопоэтических стволовых и клеток-предшественников после аутотрансплантации человеку. Nat.Med. 24 , 1683–1690 (2018).

    CAS PubMed Google ученый

  • 63.

    Lee-Six, H. et al. Динамика популяции нормальной крови человека на основе соматических мутаций. Природа 561 , 473–478 (2018). В этой работе используется полногеномное секвенирование для выявления соматических мутаций, которые могут быть использованы для определения родственных связей в гематопоэзе человека .

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 64.

    Моррисон, С. Дж., Хеммати, Х. Д., Вандиц, А. М. и Вайсман, И. Л. Очистка и характеристика гемопоэтических стволовых клеток печени плода. Proc. Natl Acad. Sci. США 92 , 10302–10306 (1995).

    CAS PubMed Google ученый

  • 65.

    Эма, Х. и Накаучи, Х. Экспансия гемопоэтических стволовых клеток в развивающейся печени эмбриона мыши. Кровь 95 , 2284–2288 (2000).

    CAS PubMed Google ученый

  • 66.

    Gekas, C., Dieterlen-Lièvre, F., Orkin, S.H. и Mikkola, H.K. Плацента — это ниша для гемопоэтических стволовых клеток. Dev. Cell 8 , 365–375 (2005).

    CAS PubMed Google ученый

  • 67.

    де Хаан Г. и Лазар С. Старение гемопоэтических стволовых клеток. Кровь 131 , 479–487 (2018).

    PubMed Google ученый

  • 68.

    Ema, H. et al. Количественная оценка способности к самообновлению единичных гемопоэтических стволовых клеток от нормальных мышей и мышей с дефицитом Lnk. Dev. Ячейка 8 , 907–914 (2005).

    CAS PubMed Google ученый

  • 69.

    Моррисон, С. Дж. И Скэдден, Д. Т. Ниша костного мозга для гемопоэтических стволовых клеток. Природа 505 , 327–334 (2014).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 70.

    Крейн, Г. М., Джеффри, Э. и Моррисон, С. Дж. Ниши гемопоэтических стволовых клеток взрослых. Nat. Rev. Immunol. 17 , 573–590 (2017).

    CAS PubMed Google ученый

  • 71.

    Zhang, C.C. & Lodish, H.F. Цитокины, регулирующие функцию гемопоэтических стволовых клеток. Curr.Opin. Гематол. 15 , 307–311 (2008).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 72.

    Эдлинг, К. Э. и Холлберг, Б. c-Kit — тирозинкиназа эссенциального рецептора кроветворных клеток. Внутр. J. Biochem. Cell Biol. 39 , 1995–1998 (2007).

    CAS PubMed Google ученый

  • 73.

    Дин, Л., Сондерс, Т.L., Enikolopov, G. & Morrison, S.J. Эндотелиальные и периваскулярные клетки поддерживают кроветворные стволовые клетки. Природа 481 , 457–462 (2012).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 74.

    de Graaf, C. A. & Metcalf, D. Тромбопоэтин и гемопоэтические стволовые клетки. Cell Cycle 10 , 1582–1589 (2011).

    PubMed PubMed Central Google ученый

  • 75.

    Decker, M., Leslie, J., Liu, Q. & Ding, L. Печеночный тромбопоэтин необходим для поддержания гемопоэтических стволовых клеток костного мозга. Наука 360 , 106–110 (2018).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 76.

    Tadokoro, Y. et al. Spred1 защищает гемопоэтический гомеостаз от системного стресса, вызванного диетой. Cell Stem Cell 22 , 713–725 (2018).

    CAS PubMed Google ученый

  • 77.

    Seita, J. et al. Lnk негативно регулирует самообновление гемопоэтических стволовых клеток, изменяя опосредованную тромбопоэтином передачу сигнала. Proc. Natl Acad. Sci. США 104 , 2349–2354 (2007).

    CAS PubMed Google ученый

  • 78.

    Takizawa, H. et al. Индуцированная патогенами передача сигналов врожденного иммунитета TLR4-TRIF в гемопоэтических стволовых клетках способствует пролиферации, но снижает конкурентоспособность. Cell Stem Cell 21 , 225–240 (2017).

    CAS PubMed Google ученый

  • 79.

    Pietras, E. M. et al. Хроническое воздействие интерлейкина-1 приводит гематопоэтические стволовые клетки к преждевременной миелоидной дифференцировке за счет самообновления. Nat. Cell Biol. 18 , 607–618 (2016).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 80.

    Такидзава, Х. и Манц, М. Г. Влияние воспаления на ранний гемопоэз и микросреду. Внутр. J. Hematol. 106 , 27–33 (2017).

    PubMed Google ученый

  • 81.

    Пьетрас, Э. М. Воспаление: ключевой регулятор судьбы гемопоэтических стволовых клеток при здоровье и болезни. Кровь 130 , 1693–1698 (2017).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 82.

    Wilkinson, A.C. & Yamazaki, S. Диета с кроветворными стволовыми клетками. Внутр. J. Hematol. 107 , 634–641 (2018).

    PubMed Google ученый

  • 83.

    Cheng, C. W. et al. Длительное голодание снижает уровень IGF-1 / PKA, способствуя регенерации на основе гемопоэтических стволовых клеток и обратной иммуносупрессии. Cell Stem Cell 14 , 810–823 (2014).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 84.

    Lazare, S. et al. Пожизненное диетическое вмешательство не влияет на функцию гемопоэтических стволовых клеток. Exp. Гематол. 53 , 26–30 (2017).

    PubMed Google ученый

  • 85.

    Tang, D. et al. Ограничение диеты улучшает репопуляцию, но снижает способность лимфоидной дифференцировки гемопоэтических стволовых клеток в раннем старении. J. Exp. Med. 213 , 535–553 (2016).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 86.

    Taya, Y. et al. Истощение диетического валина делает возможным трансплантацию немиелоаблативных гемопоэтических стволовых клеток мыши. Наука 354 , 1152–1155 (2016).

    CAS PubMed Google ученый

  • 87.

    Wilkinson, A.C, Morita, M., Nakauchi, H. & Yamazaki, S. Разветвленные цепи аминокислот истощают костный мозг для трансплантации гемопоэтических стволовых клеток, избегая токсичности, связанной с аминокислотным дисбалансом. Exp. Гематол. 63 , 12–16 (2018).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 88.

    Mantel, C. R. et al. Повышение эффективности трансплантации гемопоэтических стволовых клеток за счет уменьшения кислородного шока. Cell 161 , 1553–1565 (2015).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 89.

    Боуи, М.Б., Кент, Д. Г., Копли, М. Р. и Ивс, К. Дж. Чувствительность к факторам стали регулирует фенотип высокого самообновления гемопоэтических стволовых клеток плода. Кровь 109 , 5043–5048 (2007).

    CAS PubMed Google ученый

  • 90.

    Prashad, S. L. et al. GPI-80 определяет способность к самообновлению гемопоэтических стволовых клеток в процессе развития человека. Cell Stem Cell 16 , 80–87 (2015).

    CAS PubMed Google ученый

  • 91.

    Chhabra, A. et al. Трофобласты регулируют плацентарную гематопоэтическую нишу посредством передачи сигналов PDGF-B. Dev. Ячейка 22 , 651–659 (2012).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 92.

    Moran-Crusio, K. et al. Потеря Tet2 приводит к усилению самообновления гемопоэтических стволовых клеток и миелоидной трансформации. Cancer Cell 20 , 11–24 (2011).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 93.

    Challen, G.A. et al. Dnmt3a необходим для дифференцировки гемопоэтических стволовых клеток. Nat. Genet. 44 , 23–31 (2011).

    PubMed PubMed Central Google ученый

  • 94.

    Jeong, M. et al. Потеря Dnmt3a увековечивает гемопоэтические стволовые клетки in vivo. Ячейка. Отчет 23 , 1–10 (2018).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 95.

    Iwama, A. et al. Повышенное самообновление гемопоэтических стволовых клеток, опосредованное продуктом гена polycomb Bmi-1. Иммунитет 21 , 843–851 (2004).

    CAS PubMed Google ученый

  • 96.

    Park, I. K. et al. Bmi-1 необходим для поддержания самообновляющихся гемопоэтических стволовых клеток взрослых. Природа 423 , 302–305 (2003).

    CAS PubMed Google ученый

  • 97.

    Луис Т.С., Уилкинсон А.С., Бирман И., Джайсвал С. и Шлуш Л.И. Биологические последствия клонального гематопоэза. Exp. Гематол. 77 , 1–5 (2019).

    CAS PubMed Google ученый

  • 98.

    Calvanese, V. et al. MLLT3 управляет самообновлением и приживлением гемопоэтических стволовых клеток человека. Nature 576 , 281–286 (2019).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 99.

    Ito, K. et al. Путь PML – PPAR-δ для окисления жирных кислот регулирует поддержание гемопоэтических стволовых клеток. Nat. Med. 18 , 1350–1358 (2012).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 100.

    Ито, К.и другие. Самообновление очищенной популяции гемопоэтических стволовых клеток Tie2 + зависит от клиренса митохондрий. Наука 354 , 1156–1160 (2016).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 101.

    Ansó, E. et al. Дыхательная цепь митохондрий важна для функции гемопоэтических стволовых клеток. Nat. Cell Biol. 19 , 614–625 (2017).

    PubMed PubMed Central Google ученый

  • 102.

    Ho, T. T. et al. Аутофагия поддерживает метаболизм и функцию молодых и старых стволовых клеток. Природа 543 , 205–210 (2017).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 103.

    Ито, К. Судьбы гемопоэтических стволовых клеток посредством метаболического контроля. Exp. Гематол. 64 , 1–11 (2018).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 104.

    Agathocleous, M. et al. Аскорбат регулирует функцию гемопоэтических стволовых клеток и лейкемогенез. Природа 549 , 476–481 (2017).

    PubMed PubMed Central Google ученый

  • 105.

    Cimmino, L. et al. Восстановление функции TET2 блокирует аберрантное самообновление и прогрессирование лейкемии. Cell 170 , 1079–1095 (2017).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 106.

    Wilkinson, A.C. & Gottgens, B. Транскрипционная регуляция гемопоэтических стволовых клеток. Adv. Exp. Med. Биол. 786 , 187–212 (2013).

    CAS PubMed Google ученый

  • 107.

    Ким И., Сондерс Т. Л. и Моррисон С. Дж. Зависимость Sox17 отличает регуляцию транскрипции эмбриональных гемопоэтических стволовых клеток от взрослых. Cell 130 , 470–483 (2007).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 108.

    He, S., Kim, I., Lim, M. S. & Morrison, S. J. Экспрессия Sox17 придает потенциал самообновления и характеристики фетальных стволовых клеток взрослым гемопоэтическим предшественникам. Гены. Dev. 25 , 1613–1627 (2011).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 109.

    Zhao, Y. et al. ATF4 играет ключевую роль в развитии функциональных гемопоэтических стволовых клеток в печени плода мыши. Кровь 126 , 2383–2391 (2015).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 110.

    Mochizuki-Kashio, M. et al. Зависимость от гена polycomb Ezh3 отличает фетальные гемопоэтические стволовые клетки от взрослых. Кровь 118 , 6553–6561 (2011).

    CAS PubMed Google ученый

  • 111.

    Копли, М. Р. и др. Ось Lin28b-let-7-Hmga2 определяет более высокий потенциал самообновления гемопоэтических стволовых клеток плода. Nat. Cell Biol. 15 , 916–925 (2013).

    CAS PubMed Google ученый

  • 112.

    Кумар С. и Гейгер Х. Биология ниши HSC и распространение HSC ex vivo. Trends Mol. Med. 23 , 799–819 (2017).

    PubMed PubMed Central Google ученый

  • 113.

    Ku, H., Yonemura, Y., Kaushansky, K. & Ogawa, M. Тромбопоэтин, лиганд рецептора Mpl, взаимодействует с фактором Steel и другими цитокинами раннего действия, поддерживая пролиферацию примитивных гематопоэтических предшественников мышей. Кровь 87 , 4544–4551 (1996).

    CAS PubMed Google ученый

  • 114.

    Sitnicka, E. et al. Влияние тромбопоэтина на пролиферацию и дифференцировку гемопоэтических стволовых клеток мыши. Кровь 87 , 4998–5005 (1996).

    CAS PubMed Google ученый

  • 115.

    Ramsfjell, V. et al. Тромбопоэтин, но не эритропоэтин, напрямую стимулирует многолинейный рост примитивных клеток-предшественников костного мозга мыши в синергии с цитокинами раннего действия: различные взаимодействия с лигандами c-kit и FLT3. Кровь 88 , 4481–4492 (1996).

    CAS PubMed Google ученый

  • 116.

    Миллер, К. Л. и Ивс, К. Дж. Экспансия in vitro гемопоэтических стволовых клеток взрослых мышей с трансплантируемой способностью к восстановлению лимфомиелоидов. Proc. Natl Acad. Sci. США 94 , 13648–13653 (1997).

    CAS PubMed Google ученый

  • 117.

    Himburg, H.A. et al. Плейотропин регулирует рост и регенерацию гемопоэтических стволовых клеток. Nat. Med. 16 , 475–482 (2010).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 118.

    Ieyasu, A. et al. Система культивирования на основе полностью рекомбинантных белков специфически идентифицирует факторы поддержания гемопоэтических стволовых клеток. Stem Cell Rep. 8 , 500–508 (2017).

    CAS Google ученый

  • 119.

    Батлер, Дж. М. и др. Эндотелиальные клетки необходимы для самообновления и репопуляции Notch-зависимых гемопоэтических стволовых клеток. Cell Stem Cell 6 , 251–264 (2010).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 120.

    Nakahara, F. et al. Конструирование ниши гематопоэтических стволовых клеток путем оживления мезенхимальных стромальных клеток. Nat. Cell Biol. 21 , 560–567 (2019).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 121.

    Bai, T. et al. Экспансия примитивных гемопоэтических стволовых клеток человека путем культивирования в цвиттерионном гидрогеле. Nat. Med. 25 , 1566–1575 (2019). В этой статье описывается новое использование трехмерных культур на основе цвиттерионного гидрогеля для размножения человеческих HSC ex vivo .

    CAS PubMed Google ученый

  • 122.

    Umemoto, T. et al. Интегрин-αvβ3 регулирует опосредованное тромбопоэтином поддержание гемопоэтических стволовых клеток. Кровь 119 , 83–94 (2012).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 123.

    Антончук, Дж., Соважо, Г. и Хамфрис, Р. К. HOXB4-индуцированная экспансия взрослых гемопоэтических стволовых клеток ex vivo. Cell 109 , 39–45 (2002).

    CAS PubMed Google ученый

  • 124.

    Михарада, К., Сигурдссон, В.& Karlsson, S. Dppa5 улучшает активность гемопоэтических стволовых клеток за счет снижения стресса эндоплазматического ретикулума. Cell Rep. 7 , 1381–1392 (2014).

    CAS PubMed Google ученый

  • 125.

    Kunisato, A. et al. HES-1 сохраняет очищенные гемопоэтические стволовые клетки ex vivo и накапливает клетки боковой популяции in vivo. Кровь 101 , 1777–1783 (2003).

    CAS PubMed Google ученый

  • 126.

    Reya, T. et al. Роль передачи сигналов Wnt в самообновлении гемопоэтических стволовых клеток. Nature 423 , 409–414 (2003).

    CAS PubMed Google ученый

  • 127.

    Boitano, A. E. et al. Антагонисты рецепторов арилуглеводородов способствуют размножению гемопоэтических стволовых клеток человека. Наука 329 , 1345–1348 (2010).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 128.

    Fares, I. et al. Расширение пуповинной крови. Производные пиримидоиндола являются агонистами самообновления гемопоэтических стволовых клеток человека. Наука 345 , 1509–1512 (2014). В этой статье описывается идентификация небольшой молекулы UM171, мощного агониста самообновления HSC человека .

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 129.

    Chagraoui, J. et al. UM171 вызывает гомеостатический воспалительный детоксикационный ответ, поддерживающий самообновление HSC человека. PLoS ONE 14 , e0224900 (2019).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 130.

    Sun, H., Tsai, Y., Nowak, I., Liesveld, J. & Chen, Y. Эльтромбопаг, агонист тромбопоэтиновых рецепторов, усиливает рост гемопоэтических стволовых / примитивных клеток-предшественников пуповинной крови человека и способствует многолинейному кроветворению. Stem Cell Res. 9 , 77–86 (2012).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 131.

    Nishino, T. et al. Экспансия ex vivo гемопоэтических стволовых клеток человека низкомолекулярным агонистом c-MPL. Exp. Гематол. 37 , 1364–1377 (2009).

    CAS PubMed Google ученый

  • 132.

    Csaszar, E. et al. Быстрая экспансия гемопоэтических стволовых клеток человека за счет автоматического контроля передачи сигналов ингибиторной обратной связи. Cell Stem Cell 10 , 218–229 (2012).

    CAS PubMed Google ученый

  • 133.

    Фрэнсис, Г. Л. Альбумин и культура клеток млекопитающих: значение для приложений биотехнологии. Цитотехнология 62 , 1–16 (2010).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 134.

    Wilkinson, A.C., Ishida, R., Nakauchi, H. & Yamazaki, S. Долгосрочная экспансия ex vivo гемопоэтических стволовых клеток мыши. Nat. Protoc. 15 , 628–648 (2020).

    CAS PubMed Google ученый

  • 135.

    Nishimura, T. et al. Использование поливинилового спирта для размножения Т-лимфоцитов рецептора химерного антигена. Exp. Гематол. 80 , 16–20 (2019).

    CAS PubMed Google ученый

  • 136.

    Luchsinger, L. L. et al. Использование кроветворных стволовых клеток с низким содержанием внутриклеточного кальция улучшает их поддержание in vitro. Cell Stem Cell 25 , 225–240 (2019).

    CAS PubMed Google ученый

  • 137.

    Umemoto, T., Hashimoto, M., Matsumura, T., Nakamura-Ishizu, A. & Suda, T. Ось митохондрий Ca 2+ управляет делением клеток в гемопоэтических стволовых клетках. J. Exp. Med. 215 , 2097–2113 (2018).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 138.

    Kobayashi, H. et al. Оптимизация окружающей среды позволяет поддерживать покоящиеся гемопоэтические стволовые клетки ex vivo. Cell Rep. 28 , 145–158 (2019).

    CAS PubMed Google ученый

  • 139.

    Морган, Р. А., Грей, Д., Ломова, А. и Кон, Д. Б. Генная терапия гемопоэтическими стволовыми клетками: прогресс и извлеченные уроки. Cell Stem Cell 21 , 574–590 (2017).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 140.

    Негрин Р.С. Противостояние трансплантат против хозяина и трансплантат против лейкемии. Hematol. Являюсь. Soc. Гематол. Educ. Программа. 2015 , 225–230 (2015).

    Google ученый

  • 141.

    Broxmeyer, H. E. Повышение эффективности приживления пуповинной крови для трансплантации гемопоэтических клеток. Transfus. Афер. Sci. 54 , 364–372 (2016).

    PubMed PubMed Central Google ученый

  • 142.

    Ким Ю.J. & Broxmeyer, H. E. Иммунные регуляторные клетки в пуповинной крови и их потенциальная роль в переносимости трансплантации. Crit. Преподобный Онкол. Гематол. 79 , 112–126 (2011).

    PubMed Google ученый

  • 143.

    Cohen, S. et al. Трансплантация гемопоэтических стволовых клеток с использованием одной пуповинной крови, увеличенной по UM171: одноэлементное исследование безопасности и технико-экономического обоснования фазы 1-2. Lancet Haematol. 7 , e134 – e145 (2020). Этот недавний отчет о клинических испытаниях фазы I / II демонстрирует безопасность и осуществимость HSCT с использованием ex vivo UM171-расширенных HSC пуповинной крови.

    PubMed Google ученый

  • 144.

    Wagner, J. E. et al. Фаза I / II испытания гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови, увеличенных с помощью StemRegenin-1, поддерживает тестирование в качестве автономного трансплантата. Cell Stem Cell 18 , 144–155 (2016).

    CAS PubMed Google ученый

  • 145.

    de Lima, M. et al. Приживление пуповинной крови с сокультивированием мезенхимальных клеток ex vivo. N. Engl. J. Med. 367 , 2305–2315 (2012).

    PubMed PubMed Central Google ученый

  • 146.

    Дэвер Д. П. и Портеус М. Х. Изменяющийся ландшафт редактирования генов в гемопоэтических стволовых клетках: шаг к клинической трансляции Cas9. Curr. Opin. Гематол. 24 , 481–488 (2017).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 147.

    Gundry, M.C. et al. Технические аспекты использования CRISPR / Cas9 в гематологических исследованиях. Exp. Гематол. 54 , 4–11 (2017).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 148.

    Бхаттачарья, Д., Росси, Д. Дж., Брайдер, Д. и Вайсман, И. Л. Приживление очищенных гемопоэтических стволовых клеток в редких нишах корректирует тяжелую лимфоидную недостаточность без кондиционирования хозяина. Дж.Exp. Med. 203 , 73–85 (2006).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 149.

    Шимото М., Сугияма Т. и Нагасава Т. Многочисленные ниши для гемопоэтических стволовых клеток остаются пустыми во время гомеостаза. Кровь 129 , 2124–2131 (2017).

    CAS PubMed Google ученый

  • 150.

    Китао, Х. и Таката, М.Анемия Фанкони: нарушение реакции на повреждение ДНК. Внутр. J. Hematol. 93 , 417–424 (2011).

    CAS PubMed Google ученый

  • 151.

    Эванс, М. Обнаружение плюрипотентности: 30 лет эмбриональных стволовых клеток мыши. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 12 , 680–686 (2011).

    CAS PubMed Google ученый

  • 152.

    Иванов, А. и др. Развитие гемопоэтических стволовых клеток человека: от эмбриона до чашки. Девелопмент 144 , 2323–2337 (2017).

    CAS PubMed Google ученый

  • 153.

    Уилкинсон, А.С. Надежда на гематологические заболевания. Наука 367 , 1206 (2020).

    CAS PubMed Google ученый

  • 154.

    Лауренти, Э.& Göttgens, B. От гемопоэтических стволовых клеток до сложных ландшафтов дифференцировки. Природа 553 , 418–426 (2018).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 155.

    Хаас С., Трампп А. и Милсом М. Д. Причины и последствия гетерогенности гемопоэтических стволовых клеток. Cell Stem Cell 22 , 627–638 (2018).

    CAS PubMed Google ученый

  • 156.

    Дзежак, Э. и Спек, Н. А. Происхождение и наследие: развитие гемопоэтических стволовых клеток млекопитающих. Nat. Иммунол. 9 , 129–136 (2008).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 157.

    de Bruijn, M. F., Speck, N. A., Peeters, M. C. & Dzierzak, E. Окончательные гемопоэтические стволовые клетки сначала развиваются в основных артериальных областях эмбриона мыши. EMBO J. 19 , 2465–2474 (2000).

    PubMed PubMed Central Google ученый

  • 158.

    Иванов А. и др. Высокоэффективные гемопоэтические стволовые клетки человека сначала появляются во внутриэмбриональной области аорта-гонад-мезонефрос. J. Exp. Med. 208 , 2417–2427 (2011).

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 159.

    Ottersbach, K. & Dzierzak, E. Плацента мыши содержит гемопоэтические стволовые клетки в области сосудистого лабиринта. Dev. Ячейка 8 , 377–387 (2005).

    CAS PubMed Google ученый

  • 160.

    Kumaravelu, P. et al. Количественная анатомия развития дефинитивных гемопоэтических стволовых клеток / единиц долгосрочного репопуляции (HSC / RU): роль области аорта-гонад-мезонефрос (AGM) и желточного мешка в колонизации эмбриональной печени мыши. Развитие 129 , 4891–4899 (2002).

    CAS PubMed Google ученый

  • Обзор Viva Ex Vivo — GameSpew

    Известный многими благодаря множеству качественных динамических тем для PlayStation 4, которые он представил в магазине PSN, Truant Pixel сделал смелый шаг в разработке видеоигр со своим первым названием,
    VEV: Viva Ex Vivo .

    В нем также есть интересная и уникальная предпосылка, которая ставит вас на место микробиолога, способного контролировать искусственно созданный наноразмерный организм с помощью различных микроскопических сред.

    На бумаге все это звучит довольно сложно — больше похоже на научный проект, чем на видеоигру — но пройдите мимо интеллектуальной оболочки, и вы обнаружите, что это простая игра, в которой вам нужно взять под контроль созданное человеком существо и попробовать выжить в различных средах в течение 30 минут. Однако вместо того, чтобы наблюдать за крохотным организмом, как за дистанционно управляемым дроном, вы можете управлять им через компьютерную систему дополненной реальности; позволяя вам ближе познакомиться с вашим маленьким другом, похожим на личинку, и погрузиться в среду, в которой он находится.

    Объявление

    Изначально доступны четыре среды: пресная вода, почва, кровь и спинномозговая жидкость, и хотя они могут показаться скучными, вы никогда раньше не испытывали их в таком масштабе. Будучи настолько маленьким, каждая среда подобна инопланетному миру, который созрел для исследований и открытий, и вы тоже захотите сделать это, поскольку все они исключительно хорошо реализованы; убедительно реалистичный вид и шелковистая плавность хода. Те, кто приложит серьезные усилия и преуспеет в четырех средах, также будут вознаграждены открытием еще трех неортодоксальных примеров, включая космическое пространство и потрясающий цветник.К сожалению, крутые и запутанные требования для разблокировки этих дополнений более чем вероятно приведут к тому, что многие игроки никогда этого не сделают, что является настоящим позором, учитывая, насколько они более интересны по сравнению со стандартными средами.

    Фактический игровой процесс VEV: Viva Ex Vivo кажется очень расслабленным благодаря его медленному темпу и упору на осмотр достопримечательностей и исследования, но в то же время его никак нельзя назвать легким. После выбора среды, которую вы хотите исследовать, ваша цель — выжить в течение 30 минут, что является максимальной продолжительностью жизни вашего организма.Начиная с 100 единиц энергии, скорость, с которой вы двигаете свой организм, определяет скорость его истощения, от 0,25 единиц в секунду для медленного бездействия до колоссальной 1 единицы в секунду на максимальной скорости. Чтобы остаться в живых, вам жизненно важно ориентироваться в странном окружении и вступать в контакт с частицами энергии, которые могут быть поглощены, избегая при этом других организмов, которые могут попытаться украсть вашу собранную энергию и / или препятствовать вашему движению. Тот факт, что сбор нескольких частиц энергии перед их поглощением приводит к получению большего количества энергии, а не при их использовании по одной, также создает систему риска по сравнению с вознаграждением, где вам нужно взвесить опасность потери ваших драгоценных частиц энергии с помощью выгода от потенциально огромного увеличения продолжительности жизни.

    В то время как VEV: Viva Ex Vivo изначально впечатляет своим визуальным оформлением и предпосылкой, вскоре ваши положительные мысли превратятся в разочарование и скуку. Поскольку размещение энергетических частиц является полностью случайным, ваше выживание иногда кажется скорее случаем удачи, чем суждением, и когда вы их действительно находите, вам нужно установить с ними контакт с такой точностью, что это может оказаться настоящей болью. Это не так уж плохо, когда у вас нет других организмов, пытающихся напасть на вас, что позволяет вам не торопиться и двигаться со скоростью улитки, чтобы собрать хорошую вкусную еду, но вы редко так долго даже на самых простых уровнях без чего-то преследует или пытается напасть на вас.Проблема в том, что реальная цель каждого уровня — продержаться 30 минут — сама по себе очень утомительна. Каждый уровень, по сути, воспроизводится одинаково, только декорации и враждебные организмы внутри действуют как дифференциаторы, а это означает, что через несколько минут каждого вы чувствуете, что видели все, что он может предложить, и теряете всякую мотивацию для реального выживания.

    В общем, VEV: Viva Ex Vivo — довольно конфликтная игра. Создается впечатление, что он хочет быть довольно расслабленным, почти дзен-опытом, но это очень сложно.Это также ясно, как грязь, когда дело доходит до объяснения самого себя, упиваясь тем, что бросает в вас научный жаргон до такой степени, что он чрезмерно усложняет дело; По сути, это довольно простая игра на выживание. Забудьте о 30-минутной цели, которая, как я полагаю, для большинства игроков будет недостижимой из-за отсутствия удачи, навыков или терпения, и у вас будет визуально впечатляющий заголовок, который относительно увлекает небольшими порциями. С поддержкой PlayStation VR, обещанной в обновлении, будет интересно посмотреть, как это повлияет на игровой процесс в будущем, поскольку это должно сделать его более захватывающим и увлекательным, но на сегодняшний день трудно рекомендовать VEV: Viva Ex Vivo для кого угодно, кроме самого спокойного человека с уймой настойчивости и терпения.

    VEV: Viva Ex Vivo доступен на PS4.

    VEV: Обзор Viva Ex Vivo. Микроскопическая глубина | Зак Хейдж | Cube

    Не всегда изучаемые предметы исследуются в играх, большая часть блефа блефует в таких блокбастерах ААА, как Assassin’s Creed и Civilization ; в данном случае история. Так что жаль, что попытки более дифференциации, такие как наука, либо тривиальны в случае Surgeon Simulator , либо лицензированные риффы, которые не служат никакой цели.Когда я впервые услышал о посылке VEV: Viva Ex Vevo и о том, как она пыталась подавить это, я сразу же был заинтригован, только чтобы узнать, что он обладает сильными характеристиками по сравнению с ранее упомянутыми недостатками. Вот почему.

    Геймплей:

    Еще одна проблема может заключаться в том, как неинтересно уклоняться от красных кровяных телец из-за того, как медленно вы контролируете

    Когда я впервые играл в VEV: Viva Ex Vevo , я полностью потерялся. Отчасти это связано с тем, насколько плохо в игре представлены цели (о которых я расскажу позже), и тем фактом, что они такие голые.Вы будете собирать энергию, в то время как другие формы жизни пытаются ее забрать. Это довольно интересная идея, подумайте о полном 3D agari.o или slitheri.o . Тем не менее, игра всегда длинная, разбитая на самые легкие куски, и она утомительна независимо от сложности. Вдобавок ко всему, еще больше проблем присутствует в VEV: Viva Ex Vevo .

    История и дизайн:

    Общая компоновка дезориентирует, в дополнение к плохому углу камеры

    Если у Viva Ex Vevo только что были проблемы, о которых я только что упомянул, он мог бы стычки вокруг 4 или 5 территорий.Но постоянные проблемы, с которыми столкнутся игроки, уменьшат любую оставшуюся похвалу. Управление неудобно, настолько неудобно, что я не был уверен, двигался ли я в правильном направлении в начале или двигался вообще. Сочетание этого и плохой дальности прорисовки делает игру после смерти совершенно разочаровывающей. Это противоположность релаксации, которую разработчики явно задумали.

    Презентация / Визуальные эффекты и аудио:

    Впечатляющая графика делает игру лучше, чем она есть на самом деле.

    Если в Viva Ex Vivo есть что-то полезное, так это графика и начальное представление меню.После запуска игры вас встретят в действительно хорошо оформленной научной лаборатории, которая продолжается на протяжении всего игрового процесса. Звуковое оформление не на том же уровне, но по частям все еще терпимо, в отличие от остальной части игры.

    Заключение:

    Пройдя несколько плохо спроектированных этапов, VEV: Viva Ex Vevo — это игра, которую я ожидал увидеть на выставке дешевых технологий. Среди испорченного программного обеспечения и сломанных разоблачений он показан как едва функционирующая техническая демонстрация. На самом деле, смотреть на что-то столь же убогое было бы гораздо веселее, чем сидеть сквозь эту интерактивную грязь.

    VEV: Viva Ex Vivo получает 3/10 (болезненно)

    Мы хотели бы поблагодарить Truant Pixel за предоставленный нам код!

    Если вы хотите узнать больше о функциях и / или обзорах, подобных этой, загляните в The Cube на Medium.com или в наш Twitter @TheCubeMedium, чтобы узнать больше.

    Результаты резекции и аутотрансплантации печени ex vivo: систематический обзор и метаанализ

    https://doi.org/10.1016/j.surg.2020.05.036Получить права и содержание опухоли не могут получить пользу от резекции из-за сложных анатомических участков их поражений.Некоторым из этих пациентов может быть назначено ex vivo резекция печени и аутотрансплантация. Эта процедура состоит из полной гепатэктомии, экстракорпоральной резекции печени и аутотрансплантации остаточной печени.

    Методы

    В четырех базах данных был проведен поиск исследований, сообщающих о случаях ex vivo резекции и аутотрансплантации печени. Результаты этой процедуры были оценены с помощью метаанализа пропорций с использованием модели случайных эффектов и анализа данных отдельных участников.

    Результаты

    Было оценено 53 исследования. Мета-анализ показал, что частота резекции R0 составляет 93,4% (95% доверительный интервал: 81,0–97,9%, I 2 = 0%), частота серьезных хирургических осложнений составляет 24,5% (доверительный интервал 95%, 16,9–34,3%). , I 2 = 26%), 30-дневная смертность — 9,5% (95% доверительный интервал: 5,9–14,9%, I 2 = 0%) и 1-летняя выживаемость — 78,4% (95% доверительный интервал: 62,2–88,8%, I 2 = 64%). Нам удалось получить данные об отдельных участниках у 244 пациентов; Резекция R0 выполнена в 98 г.6%, без явной разницы между анализируемыми подгруппами. 30-дневная смертность и годовая выживаемость составили 7,9% и 82,1% соответственно. Для групп со злокачественными и незлокачественными опухолями 30-дневная смертность составила 11,3% против 6,3% ( P = 0,181), а 1-летняя выживаемость составила 65,0% против 89,7% ( P <0,001). При сравнении пациентов со злокачественными новообразованиями и пациентов с доброкачественными поражениями, серьезные хирургические осложнения возникли у 50,0% по сравнению с 21,0%; P <0,001). Регрессионный анализ показал, что исходы пациентов с доброкачественными опухолями были лучше, чем у пациентов со злокачественными опухолями (1-летняя выживаемость, отношение шансов: 4.629; 95% доверительный интервал: 2,181–10,097, P <0,001).

    Заключение

    Ex vivo Резекция и аутотрансплантация печени облегчают радикальное лечение отдельных пациентов с традиционно неоперабельными опухолями печени и нормальной функцией печени. Результаты лечения злокачественных новообразований менее удовлетворительны.

    Рекомендуемые статьиЦитирующие статьи (0)

    © 2020 Автор (ы). Опубликовано Elsevier Inc.

    Рекомендуемые статьи

    Цитирующие статьи

    Динамическая физиологическая культура тканей человека Ex vivo: систематический обзор

    Рак (Базель).2021 июн; 13 (12): 2870.

    Захир Сунавалла

    3 Отделение гепатобилиарной и панкреатической хирургии, Больницы Оксфордского университета NHS, Оксфорд OX3 7LE, Великобритания; [email protected]

    Тереза ​​Пуиг Микель, академический редактор, Хоаким Чурана Гей, академический редактор, и Розальба Д’Алессандро, академический редактор

    Поступила в редакцию 28 апреля 2021 г .; Принято 2021 3 июня.

    Дополнительные материалы

    GUID: 3C6E2AD5-BB51-4CC0-BA2E-A7C1E2960E24

    Заявление о доступности данных

    Данные из ранее опубликованных статей систематического обзора были получены из ранее опубликованных статей.Данные, подтверждающие опубликованные результаты, можно получить у соответствующего автора по запросу.

    Реферат

    Простое резюме

    В рамках исследований рака большое внимание уделяется разработке моделей, которые точно воспроизводят условия, в которых развиваются и растут опухоли. Ограничением нескольких моделей является то, что они не могут воспроизвести кровоснабжение опухоли. Наша цель состояла в том, чтобы оценить параллельную литературу, касающуюся методов динамического физиологического культивирования, которые использовались для успешного культивирования тканей человека.Мы провели систематический обзор литературы и выявили 22 статьи, в которых описывалось использование различных методов динамического культивирования для создания физиологически репрезентативной системы. Наиболее распространенным из описанных методов было использование перфузионных культур. Эта статья служит подробным справочником по новым технологиям, которые могут быть применены в исследованиях рака, чтобы улучшить физиологические условия современных методов культивирования. Реалистичные модели рака позволят лучше понять болезнь, что напрямую повлияет на результаты лечения пациентов.

    Abstract

    Обычная статическая культура не может воспроизвести физиологические условия, существующие in vivo. Последние достижения в области биомедицинской инженерии привели к созданию новых динамических систем культивирования, которые позволяют воспроизводить нормальные физиологические процессы ex vivo. Хотя физиологическая польза от его использования в культуре двумерного клеточного монослоя была подтверждена, его роль в контексте первичной культуры ткани человека еще предстоит определить.В этом систематическом обзоре были выявлены 22 статьи, в которых методы динамического физиологического культивирования сочетались с первичным культивированием тканей человека. Наиболее часто описанный метод (55%) использовал динамическую перфузионную культуру. Были успешно культивированы разнообразные первичные ткани человека. Средняя продолжительность успешного культивирования ex vivo первичной ткани человека для всех предметов составила восемь дней; однако был отмечен широкий диапазон (от 5 часов до 60 дней). В шести статьях (27%) сообщалось об успешном культивировании первичной ткани человека в течение более 20 дней.Этот обзор иллюстрирует физиологическое преимущество комбинирования динамической культуры с первичной культурой ткани человека как с точки зрения долгосрочного успеха культивирования, так и с точки зрения сохранения естественной функциональности ткани ex vivo. Дальнейшие исследовательские усилия должны быть сосредоточены на разработке точных биохимических датчиков, которые позволят осуществлять мониторинг в реальном времени и автоматическую саморегуляцию системы культивирования для поддержания гомеостаза. Объединение этих методов позволяет создать точную систему, которую можно использовать для лучшего понимания физиологии человека.

    Ключевые слова: рак , культура клеток, динамическая физиологическая культура, перфузионная культура, биореактор, первичная культура ткани человека, культура органотипических срезов ткани

    1. Введение

    При разработке системы культивирования очень важно, чтобы она могла воспроизводить различные условия in vivo для воспроизведения физиологии человека. Такая система создаст точную платформу, которая учитывает динамические физиологические условия, необходимые для гомеостатического поддержания как клеток, так и органов, при сохранении их функциональности.Это не только предоставит уникальную возможность лучше понять биологические процессы in vivo в нормальной ткани, но также может быть использовано в контексте изучения болезней человека. На протяжении десятилетий общепринятой техникой и современным стандартом культивирования клеток является статическая культура [1]. Этот адинамический метод не учитывает сложные физиологические условия in vivo из-за отсутствия перфузии (косвенная мера кровотока), которая могла бы поддерживать эпистатический запас доставки питательных веществ и позволять удалять побочные продукты метаболических отходов [2] .Таким образом, статической культуре препятствует ее неспособность интегрировать несколько биофизиологических свойств в свою систему.

    Как следствие, большое внимание в области биоинженерии было сосредоточено на разработке новых динамических систем культивирования, которые используют и имитируют нормальные физиологические процессы [3]. Было описано и опубликовано несколько различных динамических систем культивирования [4,5,6,7]. Хотя каждая система немного отличается, все они имеют общую тему: все они содержат динамический элемент, который воспроизводит свойства физиологической системы in vivo.Природа воспроизводимой in vivo физиологической системы, конечно, варьируется в зависимости от биологии, лежащей в основе желаемого эксперимента. В контексте кровоснабжения может использоваться перфузионная доставка среды, тогда как приложение динамического давления служит вариантом для оценки механотрансдукции и распределения нагрузки при оценке костного или суставного хряща [8,9]. Эта технология использовалась для оценки нормальных и патологических состояний [5,10]. Новые данные из опубликованной литературы демонстрируют превосходство методов динамического культивирования над традиционными методами статического культивирования.Crabbe et al. продемонстрировали, что использование биореактора сосудов с вращающейся стенкой для децеллюляризованной ткани легкого мыши с клетками легких и мезенхимальными стромальными клетками (МСК) костного мозга привело к значительно более высокой скорости пролиферации и снижению скорости апоптоза по сравнению со статической культурой [4] . Преимущества динамического культивирования были также отмечены в стромальном компартменте, где наблюдались более высокие скорости дифференцировки МСК в функционирующие фибробласты [4].

    Использование самого сложного метода динамического культивирования или самой передовой конструкции биореактора недостаточно для настоящего восстановления физиологической системы in vivo, особенно при использовании методики культивирования одноклеточного монослоя.Разнообразная клеточная экосистема отсутствует. В контексте исследования рака перекрестная связь между раковой клеткой и ее микросредой является важным компонентом механизма выживания клетки [11]. Следовательно, при использовании гомогенных и иммортализованных клеточных линий, полученных из опухоли человека, отсутствует контекст микроокружения и последующие симбиотические отношения. По этим причинам первичная культура ткани человека служит возможностью сохранить многоклеточный компонент и окружающую архитектуру [12].В свете нюансов технологии динамического культивирования ее роль в первичной культуре ткани еще предстоит определить. Можно предположить, что сочетание методов динамического культивирования с первичной культурой тканей человека создаст передовую платформу, на которой сохраняются физиология и многоклеточные каркасы. Целью этого систематического обзора является критический анализ современной литературы, касающейся использования методов динамического культивирования с ex vivo человеческой тканью, чтобы определить, возможно ли длительное культивирование при сохранении физиологических процессов.

    2. Методы

    Этот систематический обзор проводился в соответствии с рекомендациями «Предпочтительные элементы отчетности для систематических обзоров и метаанализов» (PRISMA) [13]. Был проведен всесторонний и подробный поиск в текущей литературе. В трех онлайн-базах данных был проведен индивидуальный поиск соответствующих статей, опубликованных в период с 1946 по 2020 год (PubMed, Medline и EMBASE). Была разработана конкретная стратегия поиска, которая объединила культуру тканей человека и динамическую физиологическую культуру.Конкретная поисковая терминология включала тканевые эксплантаты, эксплантаты, срез ткани, человеческую ткань, органотипический срез ткани для первичной культуры ткани человека и методов микрофлюидики, перфузионной культуры, перфузионного биореактора, биореактора и микрофлюидики для динамической физиологической культуры, соответственно. Стратегия была реализована посредством поиска по заголовку в сочетании с поисковыми запросами MeSH. Оба логических оператора (И или ИЛИ) были включены в поиск, чтобы обеспечить максимальный захват статьи.Окончательный поиск был дополнен ручным поиском в списках литературы как включенных, так и исключенных статей. Все результаты поиска были объединены с помощью программного обеспечения Rayyan, из которого были удалены повторяющиеся ссылки [14].

    Два автора (D.H. и A.H.) провели независимую проверку всех заголовков и выдержек из окончательного поиска по конкретным критериям включения и исключения. Наши критерии включения состояли из двух условий. Во-первых, все включенные статьи должны использовать первичную ткань человека для культуры ex vivo для своих экспериментов.Получение ткани может быть получено с помощью хирургической резекции, биопсии или патологоанатомического анализа. Во-вторых, во включенных статьях должны использоваться методы динамической физиологической культуры. Мы определили динамическую физиологическую культуру как любой метод культивирования, который включает динамический компонент кинетической энергии в систему культивирования, чтобы воспроизвести элемент нормальной физиологии in vivo. Можно воспроизвести любую физиологическую систему, например кровоток посредством перфузии или приложения давления для механотрансдукции.Обычные методы культивирования, то есть статическое культивирование, являются адинамическими и не воспроизводят нормальную физиологию; Таким образом, любая статья, использующая исключительно статические методы культивирования, была исключена. Наши критерии исключения включали любую статью, использующую однослойную двумерную культуру клеток, ткань животных, децеллюляризованную ткань или отсутствие динамической физиологической системы культивирования. Статьи, описывающие увековечение ткани (например, фиксацию в формалине) перед динамическим физиологическим культивированием, были исключены. Не полнотекстовые и неанглоязычные статьи были исключены.

    Извлечение данных было выполнено двумя авторами (D.H. и A.H.) включенных статей с использованием предварительно разработанной проформы сбора данных. Любые разногласия устранялись консенсусом. Сбор данных о динамических физиологических методах культивирования включал описание новой системы, природы и числовых значений репрезентативной физиологии, воспроизводимой. Данные, полученные в отношении первичной культуры ткани человека, включали: метод получения ткани, толщину ткани, продолжительность успешного культивирования ex vivo и сохранение функциональности нативной ткани.Нашей основной оценкой результата было определение того, какие новые методы динамического физиологического культивирования были описаны ранее и какой физиологический компонент был воспроизведен ex vivo. Наш вторичный критерий результата заключался в том, чтобы определить, привело ли использование динамического физиологического культивирования ткани человека к большей продолжительности культивирования ex vivo, при котором ткань сохраняла свою естественную функцию. Ввиду неоднородности данных формального метаанализа не проводилось. Для этого систематического обзора не требовалось никакого этического одобрения.

    3. Результаты

    3.1. Поиск литературы

    После тщательного и систематического поиска в параллельно опубликованной литературе было выявлено 2078 статей. После тщательного процесса скрининга с перекрестными ссылками на конкретные критерии включения и исключения исследования было выявлено 22 исследования, которые были включены для качественного синтеза () [15,16,17,18,19,20,21,22,23, 24,25,26,27,28,29,30,31,32,33,34,35,36]. Наиболее частой причиной исключения было использование тканей животных для культивирования ex vivo (287 статей), за которым следовала первичная культура клеток в сочетании с динамической физиологической культурой (103 статьи).

    PRISMA — блок-схема стратегии поиска и включенных статей.

    Первоначальный анализ состоял из критической оценки описанной технологии, используемой для установления динамической физиологической культуры в каждой включенной статье. Хотя было описано несколько различных методов, стало очевидно, что возникли три повторяющиеся темы, которые могут сгруппировать динамические физиологические системы культивирования в соответствии с методом, используемым для воспроизведения физиологических условий in vivo. Эти темы включали использование динамической механотрансдукции, ротационного биореактора и динамической перфузии.

    3.2. Модели культуры с механотрансдукцией

    В четырех статьях использовалась модель механической трансдукции под давлением для создания динамической физиологической культуры () () [15,16,17,18]. Эти системы включают в себя моторный элемент, который оказывает давление на культивируемую ткань. Приложенные силы давления создавались либо путем приложения прямого давления на ткань, либо путем фиксации ткани с последующим продольным растяжением [15,16,17,18]. Естественно, человеческая ткань, культивированная в этих условиях, была выбрана на основании того факта, что их естественная биологическая функция заключалась в том, чтобы ощущать механотрансдукцию или поддерживать силы сдвига.В трех из этих статей оценивалось влияние давящей нагрузки на культуру костей или межпозвонковых дисков [15,17,18]. В оставшемся исследовании оценивалось влияние на кожу (через культивирование ювенильной крайней плоти) [16]. Направление приложенной нагрузки давления варьировалось в зависимости от культивируемой ткани. Во всех трех исследованиях, в которых культивировали кость / межпозвонковый диск, применялась вертикальная нагрузка давления, тогда как при культивировании кожи использовалась горизонтальная одноосная растягивающая нагрузка [15,16,17,18]. Величина оказываемой давящей нагрузки варьировалась между исследованиями, как и продолжительность приложения силы к ткани.Во всех четырех статьях была разработана методика динамической физиологической культуры в собственной лаборатории [15,16,17,18]. План эксперимента заключался в исследовании того, способна ли ткань ex vivo выдерживать и реагировать на прилагаемую нагрузку давления. Культивированная кость часто измерялась (как по росту, так и по весу) после приложения давления. Жизнеспособность культур оценивали и представляли как долю живых (% от общего числа клеток) после окрашивания DAPi и МТТ или кальцеина AM [15,18].

    Методы динамического физиологического культивирования, воспроизводящие динамическую физиологию механотрансдукции. ( A ) иллюстративный пример метода динамического циклического сжатия. К культивируемой ткани прикладывают вертикальную нагрузку давления. Прилагаемый вес нагрузки может быть изменен в дополнение к тому, остается ли нагрузка давлением постоянным в течение длительного периода времени или носит прерывистый характер. Розовый компонент изображения представляет среду в планшете для культивирования, тогда как маленькие красные цилиндры изображают культивируемую ткань; ( B ) иллюстративный пример техники механического расширения и растяжения.Ткань сначала фиксируется, а затем к ткани прикладывается одноосная растягивающая нагрузка. Прикладное напряжение может быть устойчивым и прогрессирующим или эпизодическим. Красный цилиндр представляет культивируемую ткань.

    Таблица 1

    Характеристики исследований с использованием динамической физиологической культуры для воспроизведения динамической физиологии механотрансдукции.

    Автор Ткань культивирована Характер воспроизводимой физиологии Направление нагрузки Приложенная нагрузка Характеристики приложенной нагрузки Продолжительность приложенной нагрузки Время восстановления на биореактор
    Rosenzweig, D.(2000) [15] Межпозвоночный диск Динамическое циклическое сжатие Вертикальное Нагрузки циклически менялись 0,1 МПа и 0,3, 0,6 или 1,2 МПа Динамическое нагружение 2 периода по 2 часа на каждую нагрузку Периоды 6 и 14 ч, поддерживая низкую статическую нагрузку (0,1 МПа) Один образец полностью помещается в один независимый биореактор (1 из 3 блоков)
    Ladd. M. (2016) [16] Ювенильная крайняя плоть Механическое расширение / растяжение Одноосное растяжение Расширение кожи на 20% от ее начальной длины в день в течение 5 дней, чтобы удвоить исходную длину Динамическое растяжение 5 дн.Прогрессивное растяжение сохраняется до тех пор, пока не будет достигнута цель Поддержание каждого растяжения в течение 55 минут Один образец на блок биореактора
    Aiyangar, A. (2017) [17] Трабекулярная кость (L1 позвонок) Динамическое циклическое сжатие Вертикально 10 Н или 20 Н Динамическая нагрузка NS Период разгрузки после каждого сжатия Один образец на блок биореактора
    Walter, B.(2017) [18] Межпозвоночный диск Динамическое циклическое сжатие Вертикальное 0,1 МПа / 0,2 МПа Динамическая и статическая нагрузка 12 часов для каждой нагрузки в течение 7, 14 или 21 дня Нет времени восстановления Возможность загрузки 6 или 9 образцов одновременно

    3.3. Динамическое культивирование с ротационным биореактором

    Ротационный биореактор использовался в качестве метода динамического физиологического культивирования в шести статьях [19,20,21,22,23,24].Метод был определен использованием в нем качательного / вращательного движения (). С помощью этого метода культивировали ex vivo различные ткани (как нормальные, так и больные) (простата, меланома, миндалины, костный мозг, толстая кишка и ткань печени) [19,20,21,22,23,24]. Подробное описание каждой системы записано в. Наиболее часто используемый метод (описанный в статьях 4/6) включал использование биореакторов с вращающимися стенками, которые позволяли динамическое движение, которое позволяло культивируемой ткани находиться в непрерывном состоянии «свободного падения» [19,20,21,22].Подвешивание в таком состоянии привело к условиям низкого напряжения сдвига и способствовало массопереносу питательных веществ. В трех статьях указана скорость вращения (от 20 до 40 об / мин), тогда как в остальных статьях просто использовалось непрерывное качание [19,20,21]. В методе ротационного биореактора использовался большой объем культуральной среды в их культуральной емкости. В то время как в двух статьях сообщалось, что объем культуральной среды составляет менее 3,5 мл, в большинстве (67%) использовался значительно больший объем культивирования в диапазоне от 10 до 200 мл (в среднем 80 мл).В свете большого объема, используемого в сосуде для культивирования, был определен временной интервал между пополнением среды. Были отмечены два разных подхода. Durray et al. (2005) и Paish et al. (2019) сообщили о частой смене СМИ (с интервалом в три и один день, соответственно) [21,24]. Однако как Margolis et al. и Licat et al. меняли среду каждые семь дней, их общий объем культивирования составил 55 мл [19,20]. Из статей, описывающих использование биореактора для культивирования тканей ex vivo, ни одна не имела возможности автоматического пополнения питательной среды.Все зависели от обновления носителей вручную.

    Методы динамического физиологического культивирования, в которых используется ротационный биореактор для воспроизведения динамики физиологического потока. ( A ) Иллюстрация одного метода, при котором ткань приостанавливается в культуральной среде из-за одновременного вращения как внутреннего вращающегося цилиндра, так и внешней стенки сосуда. Как следствие, ткани (показанные красными цилиндрами) поддерживаются в состоянии непрерывного свободного падения с минимальным сдвигающим напряжением, оказываемым на них; ( B ) иллюстрация того, как биореактор с качающейся платформой обеспечивает динамическое культивирование.Последовательное качающееся движение позволяет потоку среды (показано розовым цветом на рисунке) по культивируемой ткани. Существующие ранее питательные среды перераспределяются по емкости для культивирования. Однако автоматического обновления СМИ нет.

    Таблица 2

    Характеристики исследований с использованием ротационного биореактора с физиологической динамикой потока.

    Автор Культурная ткань Описание биореактора Скорость вращения Интервал времени для обмена средой Объем среды в биореакторе
    Margolis, L.(1999) [19] Ткань предстательной железы Культивированная ткань суспендирована в жидкой культуральной среде, заключенной во внутренний и внешний вращающийся цилиндр. Ткань и среда вращаются синхронно под действием небольшой силы сдвига. Вращение приводит к равновесию между осаждением ткани / клеток, вызванным гравитацией, и центробежной силой. 30 об / мин Среда биореактора обновлялась на 50% каждые 7 дней 55 мл
    Licato, L. (2001) [20] Ткань меланомы Биореактор сосуда с вращающимися стенками полностью заполнен жидкостью.Происходит специфическое вращение вокруг горизонтальной оси, в результате чего культивируемая ткань или клетки находятся в состоянии непрерывного свободного падения в условиях низкого напряжения сдвига, предназначенного для массопереноса питательных веществ. 20 об / мин Носитель заменяется раз в неделю. Пузыри удаляли из сосудов ежедневно, так что камера оставалась полностью заполненной жидкостью 55 мл
    Durray, P. (2005) [21] Тонзиллярная ткань Тот же метод и техника, что описаны Марголисом (1999). ) 35–40 об / мин Образцы среды отбирались каждые 3 дня и заменялись. 200 мл
    Ferrarini, P. (2013) [22] Костный мозг Горизонтально вращающийся биореактор, используемый для создания ламинарного потока (система вращающихся культур клеток). Культивированные трехмерные ткани подвешены в положении «свободного падения», чтобы минимизировать турбулентность и поперечные силы в ткани. Газообменная мембрана встроена в сосуды для обеспечения оптимального насыщения кислородом. Постоянно качается качающимся устройством NS 10 мл
    Drew, J.(2015) [23] Ткань толстой кишки Эксплант помещен на проволочную сетку на 6-луночные планшеты с минимальным покрытием среды над эксплантатом. Выращиваются при постоянном раскачивании в инкубаторе. Непрерывно качал качающимся устройством Камеру промывали 95% O 2 /5% CO 2 в течение 10 минут в каждой точке культивирования. Культивирование в течение 14 часов 3,5 мл
    Paish, H. (2019) [24] Ткань печени Планшет BioR, используемый для культуры ткани ex-vivo.Планшет BioR имеет 2 лунки, которые связаны между собой общим каналом, чтобы облегчить перекрестную связь между лунками. Планшет культивируют на качалке платформы биореактора. Ткань, культивируемая на транс-лунке Постоянное качание с помощью качалки Среда пополняется ежедневно 3 мл

    3.4. Культура динамической перфузии

    Последним методом динамической физиологической культуры, отмеченным в этом систематическом обзоре, было использование динамической перфузии () () [25,26,27,28,29,30,31,32,33,34,35].Это был наиболее часто используемый метод динамической культуры во включенных статьях (55%). Динамическая перфузия выполнялась как на микро, так и на макроуровне. Скорость потока для трех изделий превышала 100 мл / мин [25,27,33]. Была отмечена корреляция между тканевой культурой и доставленной скоростью потока. Культура тканей сердечно-сосудистой системы (сердце, вена и т. Д.) Привела к использованию гораздо более высоких скоростей перфузионного потока. В контексте перфузионного культивирования характер режима перфузии (непрерывный или прерывистый) служит важной переменной, влияющей на доставку питательных веществ.В рамках этого систематического обзора перфузия с прерывистым потоком была наиболее часто применяемой методикой (32%) [25,26,27,29,30,33,34]. Для создания перфузионного потока требуется движущая сила, поэтому для генерирования кинетической энергии используется насосный механизм. Наиболее распространенным методом подачи потока был перистальтический насос (23%), за ним следовал шприцевой насос (18%). Важным компонентом системы перфузионного культивирования является управление отходами оттока. Можно использовать два разных подхода; пассивное управление оттоком основано на безопорном дренаже системы, где дренаж достигается за счет оттока каналов с широким отверстием и гравитационного притяжения.Такой подход может не подходить для систем с высокими расходами и небольшими объемными камерами. Несоответствие скорости оттока и притока приведет к чрезмерной доставке среды в систему с последующим затоплением. Активное управление сливом облегчается за счет использования насосного устройства, прикрепленного к дренажному каналу, которое активно удаляет среду из системы, таким образом, можно достичь более высоких скоростей дренажа. Пассивное управление оттоком было описано в 32% включенных статей о динамической перфузии [26,28,31,32,33,34].

    Динамическая перфузионная культура. Иллюстрация метода динамической перфузионной культуры. Активный приток среды в биореактор осуществляется механическим насосом. Приток может быть непрерывным или прерывистым. Отводящий выходной канал необходим для предотвращения перегрузки системы объемом. Управление оттоком может быть пассивным по своей природе или может потребовать активного слива через насосный механизм. Красные цилиндры представляют культивируемую ткань. Смежные лунки для культивирования могут быть реализованы для облегчения культивирования нескольких тканей.Дальнейшие модификации системы включают каркас для тканевой поддержки и канал для доставки лекарственного средства.

    Таблица 3

    Характеристики исследований с использованием динамической перфузионной культуры.

    NS мл 40–240 мл / мин
    Автор Культивирование тканей Скорость перфузионного потока Время потока Механизм насоса Объем камеры Управление оттоком
    [S. Подкожная вена 100 мл / мин Прерывистый Перистальтический насос 500 мл NS
    Strehl, R.(2005) [26] Суставной хрящ из бедренной трохлеарной области 1 мл / ч Прерывистый Перистальтический насос Н / Д Пассивный
    Cheah, L. (2010) [27] Ткань сердца 120 мл / мин Прерывистый Перистальтический насос 400 мл Активный
    Midwoud, P. (2011) [28] Ткань печени 101892 мин Перистальтический насос 25 мкл Пассивный
    Atac, B.(2013) [29] Ювенильная крайняя плоть 7–70 мл мин. Прерывистая Микронасос 500 мл Активный
    Astolfi, M. (2016) [30] Ткань яичника и простаты 20 мкл / мин Прерывистый Насос для микропипетки 500 мкл Активный
    Perrard, M. (2016) [31] Ткань яичка NS NS NS Пассивный
    Мураро, М.(2017) [32] Ткань груди 0,3 мл / мин Непрерывный Шприцевой насос 8 мл Пассивный
    Пиола, М. (2017) [33] Подкожная вена 1892 Прерывистый Перистальтический насос 50 мл Пассивный
    Бауэр, Р. (2017) [34] Ткани гортани, ротоглотки или полости рта 2 мкл / мин Прерывистый Шприцевой насос NS Пассивный
    Rodriquez, A.(2019) [35] Ректальная ткань 1,5 мл ч -1 Непрерывный Шприцевой насос 480 мкл Активный

    3.5. Успешное культивирование тканей человека ex vivo с помощью методов динамического культивирования

    В этом систематическом обзоре впоследствии проанализировали, какие ткани человека были успешно культивированы ex vivo с помощью методов динамического физиологического культивирования. Ткани сгруппированы по системам органов. Это включало сердечно-сосудистую, опорно-двигательную, мочеполовую, желудочно-кишечную системы и прочее ().Ткани мочеполовой системы наиболее часто культивировали с помощью динамической физиологической культуры (6/22, 27%), а затем — ткани желудочно-кишечного тракта (5/22, 23%). Средняя продолжительность успешного культивирования ex vivo первичной ткани человека для всех предметов составила 8 дней; однако был отмечен широкий диапазон (от 5 часов до 60 дней). В шести статьях (27%) сообщалось об успешном культивировании первичной ткани человека в течение более 20 дней. К ним относятся культивируемый суставной хрящ, межпозвоночный диск, костный мозг, ткань предстательной железы, ткань яичек и ткань рака груди.О самой продолжительной продолжительности успешного культивирования ex vivo сообщили Perrard et al., При котором тестикулярная ткань успешно культивировалась в течение 60 дней [31]. Функциональность ткани сохранялась ex vivo с непрерывным сперматогенезом, детектируемым флуоресцентной идентификацией гибридизации in situ гаплоидных клеток на 60-й день. Из всех тканей, культивируемых ex vivo, ткань опорно-двигательного аппарата культивировалась в течение наибольшего времени (средний 21-дневный диапазон 10–56). дней).

    Таблица 4

    Описание исследований с успешной культурой ex vivo человеческой ткани с использованием динамической физиологической культуры.

    Оценка функции сохранения ткани 98108 Оценка состояния ткани 98108 8 Оценка состояния ткани в тканях R.

    92 10 дней Посмертное исследование Окружающая среда Фрагменты × 2 мм биология определяется выделением опухоли в среду
    Автор Культивирование ткани Состояние ткани Продолжительность культивирования Ex-Vivo Получение ткани Продолжительность ишемической клеточной травмы Подготовка образца ткани Оценка биомассы Доставка лекарств
    Оценка
    Описание
    Желудочно-кишечная система Duray, P.(2005) [21] Тонзиллярная ткань Нормальная 12 дней Тонзиллэктомия Обработана в течение 5 часов после операции Ручная диссекция (скальпель) Кубики 2 мм Гистологическая оценка N / N / A Посев миндалин Borelia burgoferfi с последующим подтверждением бактериальной пролиферации с помощью ПЦР.
    Midwoud, P. (2011) [28] Ткань печени Нормальная 24 часа Избыточная донорская ткань после трансплантации разделенной печени N / A Микротом (резак ткани Крамдика ) Толщина 100 мкм Синтез желчных кислот с помощью CYP71, Тенденции в уровне трансаминаз Синтез желчных кислот Метаболизм лекарств Совместное культивирование печени с кишечным срезом (мульти-тканевая культура)
    Paish, H.(2019) [24] Ткань печени Нормальная 6 дней Гепатэктомия 2 ч Вибратом
    (Leica VT1200S)
    Толщина 250 мкм Секреция альбумина Секреция альбумина Медикаментозный фиброз (TGFβ1 + PDGFββ) и противофиброзный препарат (ALKi) во время исследования популяций иммунных клеток культура. Платформа для проверки антифиброзных препаратов
    Rodriquez, A. (2019) [35] Ткань толстой кишки Заболевание (рак прямой кишки) 3 дня Колэктомия N / A Vibratome 3009 Толщина 250 мкм Окрашивание по Hoechst Н / Д Да — Оценка по скорости апоптоза и пролиферации Комплексный скрининг лекарств (проверено 3 режима)
    Скелетно-мышечная система Strehl(2005) [26] Суставной хрящ из бедренной трохлеарной области Нормальный 56 дней Хирургические образцы Обработано сразу после операции Пробойник из нержавеющей стали (MiltexInstruments) Цилиндрические эксплантаты полной толщины 3 мм × 3 мм Гистологическая оценка морфологии и окрашивание внеклеточного матрикса ИГХ. Определен митотический индекс. Н / Д Н / Д Определение состава гиалинового хряща с изменением субпопуляции с течением времени.Способность к пролиферации ex vivo
    Aiyangar, A. (2014) [17] Трабекулярная кость (L1 позвонок) Нормальный Нет Посмертное извлечение Нет Ленточная пила с алмазным покрытием 5 мм в высоту и 10 мм в диаметре Н / Д Механические свойства (распределение давления) Н / Д Радиологическая оценка (КТ) объема тела позвонка.
    Уолтер, Б.(2014) [18] Межпозвоночный диск Нормальный 21 день Образцы поясничного трупа НЕТ Гистологическая ленточная пила (Exakt310) НЕТ Анализ жизнеспособности (окрашивание MTT) Механические свойства (механотрансдукция) Н / Д Всесторонняя оценка приложения давления и последующей реакции ткани
    Розенцвейг, Д. (2016) [15] Межпозвонковый диск Нормальный Менее 4 часов Высокоскоростная дрель (Foredom) Регулируемая высота диска — 0.8–1,65 см Анализы жизнеспособности (окрашивание MTT и DAPI) Механические свойства (механотрансдукция) НЕТ Подробная оценка приложения давления с прерывистым циклом с периодом восстановления
    Margolis, L. (1999) [19] Ткань предстательной железы Нормальная 28 дней Трансуретральная простатэктомия / игольчатая биопсия N / A Ручная диссекция (рассечение) Блоки 1 × 1 мм Гистологическая оценка НЕТ НЕТ Определение экспрессии ПСА ex-vivo
    Ladd, M.(2009) [16] Ювенильная крайняя плоть Нормальная 6 дней Плановое обрезание НЕТ НЕТ НЕТ Гистологические и IHC оценки Механические свойства кожи окрашивание) Н / Д Оценка прочности кожи на разрыв
    Мочеполовая система Atac, B. (2013) [29] Ювенильная крайняя плоть Нормальная 14 дней Сразу после операции НЕТ НЕТ Гистологическое исследование.IF-окрашивание на апоптоз и пролиферацию. НЕТ НЕТ Мультиорганная культура — кожа и волосы
    Perrard, M. (2016) [31] Ткань яичка Нормальная 60 дней Орхидэктомия Нет / A N / A От 20 до 50 мм3 изолированных сегментов семенных канальцев Гистологическая оценка морфологии Сперматогенез N / A Оценка сперматогенеза ex vivo
    Astolfi(2016) [30] Ткань яичников и простаты Заболевание (рак яичников и простаты) 8 дней Хирургическая резекция Обработано в течение 3 часов после операции Вибратом 300 микрометров красители — CTG и PI N / A Да, карбоплатин использовался. Персонализированный анализ лекарств
    Сердечно-сосудистая система Surowiec, S. (2000) [25] Подкожная вена Нормальная 96 ч Сегменты, полученные после операции шунтирования коронарной артерии Ручное рассечение (рассечение) В этих экспериментах использовалась средняя длина сосуда 5 см (диапазон 3–10 см) Гистологическая оценка морфологии и окрашивание BrdU для выявления пролиферации Динамический ответ на расслабление и сокращение стимула Да, артеренол + карбахол Определение реакции ткани на внешние раздражители
    Cheah, L.(2010) [27] Ткань сердца Нормальная 5 часов Кардиохирург Помещен в перфузионную камеру в течение 60 минут после операции Ручная диссекция (рассечение) НЕТ Анализы жизнеспособности и высвобождение ЛДГ Сократительная функция НЕТ Ответ на электростимуляцию сердечной ткани
    Пиола, М. (2017) [33] Подкожная вена Нормальная 7 дней Сегменты, полученные после коронарного шунтирования Сразу после операции Ручная диссекция (расслоение) N / A Гистологическая оценка морфологии.ИГХ для индекса пролиферации Динамический ответ на стимулы НЕТ Определение влияния гемодинамических стимулов на проходимость сосудов
    Muraro, M. (2017) [32] Ткань груди Заболевание (рак груди) 21 день Хирургическая резекция Сразу после операции Вибратом (устройство для измельчения ткани McIlwain ) Гистологическая оценка морфологии.Оценка индекса распространения и иммунного профилирования рака. Н / Д Да, антиэстрогеновая терапия Сохранение микроокружения опухоли — терапия блокадой иммунных контрольных точек завершена
    Разное Licato, L. (2001) [20] Ткань меланомы Diseased 14 дней Хирургическая резекция Сразу после операции Ручная диссекция (скальпель) 1-2 мм 2 Гистологическая оценка морфологии.ИГХ и иммунное профилирование опухоли НЕТ НЕТ Иммунное профилирование опухоли
    Феррарини П. (2013) [22] Костный мозг Заболевание (множественная миелома) 24 дней Биопсия костного мозга НЕТ НЕТ 2–3 мм 3 Гистологическая оценка морфологии Анализ супернатантов секрета опухоли Да, Бортезомиб
    Bower, R.(2017) [34] Ткань гортани, ротоглотки или полости рта Заболевание (ткань плоскоклеточного рака головы и шеи) 48 часов Хирургическая резекция В течение 90 минут после иссечения Ручное вскрытие (скальпель) N / A Гистологическая оценка морфологии. Анализ жизнеспособности с пролиферацией и гибелью клеток с помощью проточной цитометрии НЕТ НЕТ Определение тенденций жизнеспособности ex vivo
    Riley, A.(2019) [36] Ткань щитовидной железы Заболевание (рак щитовидной железы) 24 часа Хирургическая резекция во время тиреоидэктомии В течение 60 минут после хирургического иссечения Вибратом (Leica VT1200S) диаметром 5 мм Гистологическая оценка морфологии. Анализ жизнеспособности. ИГХ для пролиферации Производство гормонов — высвобождение тироксина Н / Д Определение сохранения эндокринной функции

    Как нормальные, так и больные ткани успешно культивировались ex vivo с использованием динамических физиологических методов культивирования.Значительно более высокая доля включенных статей культивировала нормальную ткань ex vivo (15/22, 68%), что отражает предполагаемую важность установления физиологических условий при культивировании первичной ткани человека ex vivo. Ранее сообщалось, что временной интервал между получением ткани и посевом должен быть минимальным, чтобы сохранить целостность ткани и уменьшить ишемическое повреждение клеток. Поэтому мы исследовали указанные временные метрики окна перехода ткани / клеточного ишемического повреждения во включенных статьях.Обработка ткани была быстрой и в 45% статей произошла в течение 2 часов после получения ткани. Было описано несколько различных методов подготовки образцов ткани / создания срезов ткани. Наиболее частым методом препарирования ткани служило ручное рассечение ткани (8/22, 36%), за которым следовало создание среза ткани вибратомом (5/22, 23%). Условия культивирования, в частности состав среды и добавки, значительно различались между типами тканей (дополнительная таблица S1).Антибиотикопрофилактика инфекции использовалась в 50% включенных статей. Из 11 статей, в которых в средствах массовой информации использовалось рутинное добавление антибиотиков, в 100% сообщалось о комбинированном режиме для антимикробного покрытия. Толщина ткани служит важным параметром, который может повлиять на скорость культивирования в долгосрочной перспективе. Проникновение кислорода через ткань затрудняется, если ткань имеет значительную толщину. Как отмечалось в этом систематическом обзоре, во всех исследованиях толщина ткани была минимальной.

    Определение жизнеспособности культивируемых первичных тканей человека служит важным компонентом любой системы культивирования ex vivo. Что ясно из этого систематического обзора, так это то, что для оценки жизнеспособности можно использовать несколько различных методов. В 64% включенных статей гистологическая оценка использовалась для оценки морфологии ткани. Дальнейшее окрашивание (иммунохимическим или флуоресцентным окрашиванием) дает уникальную возможность количественно оценить активные биологические процессы в ткани, особенно скорость пролиферации клеток или апоптоза.Помимо определения жизнеспособности, важным фактором, определяющим эффективность первичной культуры ткани человека, является оценка того, сохраняется ли функция нативных тканей ex vivo. Из 22 включенных статей 12 (55%) формально оценивали функцию нативных тканей, примеры которой включают синтез желчных кислот, секрецию альбумина, выработку гормонов, реакцию на механическую нагрузку и сложные биологические процессы, такие как сперматогенез.

    4. Обсуждение

    Последние технологические достижения привели к разработке систем культивирования следующего поколения.Эти системы включают динамический, кинетический элемент для восстановления физиологического процесса in vivo. Из этого систематического обзора ясно, что, несмотря на нюансы этой технологии и ее очевидные физиологические преимущества, она еще не получила широкого распространения в качестве метода культивирования в научно-исследовательском сообществе. Это очевидно в рамках данного обзора, поскольку было отмечено, что только 22 статьи объединяют первичную культуру тканей человека с динамической физиологической культурой. Используемая технология зависит от характера воспроизводимого физиологического процесса.Чтобы имитировать механобиологию распределения нагрузки давления по суставной поверхности, в систему культивирования следует включить цилиндр сжатия с осевой нагрузкой, тогда как использование микрофлюидной перфузии может восстановить кровоснабжение тканей. При разработке такой системы физиология должна влиять на конструкцию и определять ее, чтобы создать метод динамической физиологической культуры.

    С момента первого опубликованного описания статической однослойной клеточной культуры этот метод более века служил золотым стандартом культивирования [37,38].Хотя этот метод явно служит определенной цели, следует быть осторожным с тем фактом, что он не является физиологически репрезентативным для условий in vivo. Ткани in vivo имеют обширную сеть сосудистых капилляров, которые обеспечивают питательные вещества и кислород, необходимые для клеточных биологических процессов. Ex vivo ткань и тканевые конструкции лишены капиллярной сети и поэтому зависят от пассивной диффузии кислорода и питательных веществ в клетки [39]. Предел диффузии кислорода составляет приблизительно 200 мкм, таким образом, клетки, находящиеся за пределами этого предела, испытывают недостаток питательных веществ в статической культуре [39].Было продемонстрировано, что недоедание оказывает неблагоприятное влияние на пролиферативную способность клеток и отложение нового матрикса [40]. Malda et al. далее продемонстрировали, что депривация питательных веществ приводит к неравномерному отложению матрикса с уменьшенным количеством в центральной части по сравнению с периферией в тканевых конструкциях [41,42]. Таким образом, это иллюстрирует влияние регионального истощения питательных веществ на биологические процессы. В рамках этого систематического обзора мы заметили, что толщина ткани была минимальной, чтобы способствовать максимальной диффузии кислорода.Оптимальная толщина ткани будет варьироваться в зависимости от типа культивируемой ткани и конструкции системы культивирования.

    Возможность перфузии сред в микромасштабе (микрофлюидика) значительно расширилась за последнее десятилетие. Сочетание микрофлюидной перфузии с клеточной культурой привело к разработке платформы «Орган на чипе» (OOC) [43,44,45,46]. Этот подход позволяет создать функциональную физиологическую единицу ex vivo, которую можно оценивать и управлять ею [43].С момента первого описания OOC в 2010 году (модель сердца и легких) технология быстро развивалась, и сложность платформы чипа была увеличена либо путем введения нескольких тканевых компонентов, либо различных физиологических стимулов [46]. Как подчеркивается в обзорной статье Low et al., Технология OOC может быть особенно полезной в контексте открытия лекарств, особенно при оценке побочных эффектов и профилей токсичности лекарств [46]. Универсальность платформы OOC позволяет пользователям не только изучать механизм заболевания (например, метастатическое распространение или инфильтрацию иммунных клеток), но также позволяет изучать нормальные физиологические процессы человека (такие как гормональная ось кишечника или дифференцировка стволовых клеток) [ 46].Как показано в обзоре Wu et al., Системы OOC могут различаться в зависимости от производителя и модели; однако все они обладают одними и теми же фундаментальными концепциями дизайна [47]. К ним относятся способность культивировать органический материал (будь то клетки или ткань), наличие динамического элемента, который вводит кинетическую энергию в систему (чаще всего это микрожидкостный поток) и, наконец, способность доставки лекарств и обнаружения реакции [ 47]. Система может потребовать дальнейших модификаций, в частности, в отношении природы культивируемых тканей или клеток, скорости потока, границы раздела воздух-жидкость и того, требуется ли поддерживающий каркас [47].На сегодняшний день описаны ОКП для печени, легких, кишечника, сердца и почек [47]. Сложность платформы может быть дополнительно увеличена за счет совместного культивирования нескольких клеточных линий или образцов тканей. Tsamandouras et al. опубликовали свой опыт совместного культивирования кишечника и печени на своих OOC [45]. Они исследовали фармакокинетические изменения после доставки лекарств в контексте мультиорганной культуры [45]. Конечная цель технологии OOC — увеличить емкость системы, чтобы можно было совместно культивировать несколько тканей, с предпоследней целью — создать «человека на чипе» [47].На сегодняшний день наиболее полная система включает 10 органов в рамках своей платформы [48]. Помимо оценки функции органов (либо путем измерения синтетической функции, такой как продукция С-пептида поджелудочной железой, либо путем измерения трансэпителиального / трансэндотелиального электрического сопротивления кожи), авторы также смогли проанализировать метаболизм диклофенака во всех органах [48]. Несколько других групп с тех пор опубликовали публикации о пользе мультиорганной культуры; однако они преимущественно происходили в условиях одноклеточной культуры [45,48,49,50].Внедрение технологий OOC с первичными тканями человека еще не получило широкого распространения. В этом систематическом обзоре было выявлено только 11 статей, в которых использовалась динамическая перфузия (с помощью системы доставки с помпой) и первичная ткань человека. Возможным объяснением этого является то, что из этих 11 статей, 10 из которых (91%) построили платформу OOC в своей собственной лаборатории «in-house». Таким образом, отсутствие доступа к коммерчески доступным платформам OOC может помешать их широкому использованию.

    Появляющаяся литература продемонстрировала преимущества культивирования органоидов, полученных из тканей человека, в микрофлюидной системе [51,52].Schuster et al. получили органоиды от пациентов с раком поджелудочной железы и провели высокопроизводительный скрининг лекарств [52]. Опубликованные протоколы создания органоидов требуют начальной стадии диссоциации тканей с последующим ферментативным расщеплением до образования органоидов и культивирования [53,54]. Остается трудным определить, в какой степени вся первичная ткань была успешно воспроизведена ex vivo в органоиде с помощью этого многоэтапного подхода к созданию. Микроокружение опухоли представляет собой разнообразную многоклеточную экосистему, и неясно, в какой степени она воспроизводится в органоиде.В рамках этого обзора мы определили первичную культуру ткани как любую технику, которая выполняет минимальные шаги модификации или обработки ткани после ее получения и до культивирования. Было сочтено, что это послужит более надежным определением первичной ткани и как таковое уменьшит неоднородность включенных статей. Поэтому культура органоидов не была включена в систематический обзор. Ранее было опубликовано несколько исчерпывающих обзоров литературы по культуре микрожидкостных органоидов [55,56].

    Одним из важных аспектов биохимического ответа клетки на механические стимулы, который следует учитывать, является роль вездесущего вторичного мессенджера, кальция. Было продемонстрировано, что внутриклеточная концентрация иона кальция (Ca 2+ ) принимает активное участие в нескольких физиологических сигнальных путях и чувствительна к механическим сигналам [57]. Ни в одной из статей этого обзора не исследовалась роль Ca 2+ среди тканей человека, культивируемых с помощью методов динамического физиологического культивирования.Поэтому необходимы дальнейшие исследования роли Ca 2+ в культивируемых тканях человека среди этих динамических условий, чтобы лучше понять их представление о реальных физиологических условиях с точки зрения механической стимуляции тканей и клеток.

    Для любой системы культивирования важным фактором является доставка питательных веществ к тканям. В статической культуре присутствует конечная концентрация питательных веществ. Со временем в результате размножения и активных клеточных биологических процессов доступность питательных веществ уменьшается.Замена среды вызывает резкие изменения окружающей среды и внезапную трансформацию от истощения питательных веществ к настройкам избытка питательных веществ, которые могут вызвать клеточный стресс [58]. Гарсия-Монтеро и др. продемонстрировали, что обмен средой приводит к повышенной регуляции стресс-активируемых генов, таких как p38, ERK1 / 2 и JNK [58]. Градиент концентрации питательных веществ может быть очевиден в статической культуре, в результате чего более высокая доступность присутствует на периферии ткани по сравнению с центром [58]. Как следствие, может развиться центральный некроз и возникать пространственные вариации функции тканей [59].Очевидно, что с такими ограничениями в статической культуре перфузионная культура может преодолеть такие проблемы. В рамках этого систематического обзора было отмечено, что подавляющее большинство методов динамического физиологического культивирования (77%) предусматривают непрерывный обмен средами внутри их системы либо посредством постоянной эпистатической подачи через перфузионный насос (11/22), либо посредством вращательного движения, чтобы гарантировать смешивание питательных веществ (6/22). Это подчеркивает предполагаемую важность доставки питательных веществ в первичную культуру тканей человека.

    Сбор ткани может служить этапом ограничения скорости. Окно клеточного ишемического повреждения (временной интервал между получением и посевом) должно быть сведено к минимуму. В рамках этого обзора культура ткани произошла в течение 2 часов после получения ткани в 45% включенных статей. Методы подготовки тканей в разных исследованиях различались. Ручное рассечение было наиболее часто используемым методом; тем не менее, воспроизводимость и создание однородных последовательных срезов ткани с помощью этого метода должны быть подвергнуты сомнению.Среда для культивирования была сильно дополнена многочисленными факторами роста, антибиотиками и производными аминокислот (дополнительная таблица S1). Создание универсальной тканеспецифичной среды для культивирования может обеспечить согласованность между исследованиями и сопоставимость успешных долгосрочных норм культивирования.

    В рамках этого систематического обзора следует отметить ограничения. Включенные статьи очень разнородны, поэтому формальный метаанализ не проводился. Хотя культивировали несколько различных первичных тканей человека, дублировалась лишь меньшая часть тканей; таким образом, формальное сравнение продолжительности успешного культивирования ex vivo среди одного и того же типа ткани было невозможно.Были отмечены значительные различия в составе культуральной среды, используемой между исследованиями, что может напрямую влиять на успешную продолжительность культивирования. Большинство включенных статей (64%) построили свою динамическую физиологическую систему культивирования внутренними силами («в доме»), таким образом оценивая воспроизводимость описанных методов культивирования, и их результаты еще предстоит определить в более широком контексте.

    Поскольку область биомедицинской инженерии продолжает развиваться заметными темпами, исследовательские усилия должны быть сосредоточены на разработке и проверке новых методов культивирования, которые коммерчески доступны по разумной цене.Высокая цена приобретения материалов для создания системы или коммерческой покупки ограничивает доступность этой технологии для более широкого использования в исследовательском сообществе. Дальнейшие усилия должны гарантировать, что разумная цена за единицу возможна при использовании повторно используемых компонентов. Поскольку существует значительное количество моделей культур, созданных внутри лабораторных групп, существует необходимость в разработке стандартизированных критериев отчетности, как с точки зрения дизайна системы, так и с точки зрения функционирования в дополнение к оценке функциональной жизнеспособности.Внедрение международного реестра обеспечит однородность литературы, упростит прозрачность данных и обеспечит воспроизводимость культуральных экспериментов. Возможность культивирования нескольких органов одновременно может потребовать специализированных универсальных сред. Возможно, наиболее важным является разработка надежных сенсорных мониторов в рамках этих систем культивирования [60]. Включение точных датчиков в эту технологию облегчило бы мониторинг среды культивирования в реальном времени. Это даст возможность вмешаться на ранней стадии и изменить или изменить условия культивирования по мере необходимости.Это облегчило бы коррекцию дисбаланса электролитов или питательных веществ в системе культивирования. Такой автоматический мониторинг обеспечит регулирование и поддержание гомеостатических условий культивирования. Сочетание датчиков с высокой пропускной способностью и коммуникационного программного обеспечения также увеличивает возможность удаленного мониторинга. Использование программного обеспечения на основе искусственного интеллекта позволит системе культивирования саморегулироваться и станет значительным шагом на пути к созданию виртуального пациента.

    5. Выводы

    Сочетание методов динамического физиологического культивирования с первичной культурой тканей человека служит уникальной возможностью для создания физиологически репрезентативной системы культивирования. Этот систематический обзор продемонстрировал, что более широкое применение этой технологии еще предстоит реализовать в исследовательской практике. Характер физиологического процесса, воспроизводимого ex vivo, будет определять дизайн системы культивирования. Отмечено успешное долгосрочное культивирование ex vivo ряда первичных тканей человека.Распознавание и воспроизведение нормальных физиологических процессов, определяющих жизнеспособность тканей, позволило сохранить естественную функцию тканей. Необходимы дальнейшие исследования для определения оптимальных условий культивирования и физиологических параметров для тканевых экспериментов. Использование как методов динамического физиологического культивирования, так и первичной культуры тканей человека дает исключительную возможность для дальнейшего изучения физиологии человека в условиях ex vivo.

    Вклад авторов

    Концептуализация: D.L.H., E.O .; Методология, поиск литературы: D.L.H., A.H., E.O .; Сбор данных: D.L.H., A.H .; Анализ и интерпретация данных: D.L.H., A.H., Z.S., S.M., E.O .; Подготовка оригинального черновика: D.L.H., A.H., Z.S., S.M., E.O .; Обзор и редактирование: D.L.H., A.H., Z.S., S.M., E.O. Все авторы прочитали и согласились с опубликованной версией рукописи.

    Финансирование

    Авторы не раскрывают финансовую информацию и не получали финансирования в связи с этой работой.

    Заявление институционального наблюдательного совета

    Не применимо (систематический обзор литературы).

    Заявление об информированном согласии

    Не применимо (систематический обзор литературы).

    Заявление о доступности данных

    Данные этого систематического обзора были получены из ранее опубликованных статей. Данные, подтверждающие опубликованные результаты, можно получить у соответствующего автора по запросу.

    Конфликт интересов

    Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

    Сноски

    Примечание издателя: MDPI остается нейтральным в отношении юрисдикционных претензий на опубликованных картах и ​​филиалов организаций.

    Ссылки

    2. Селден К., Фуллер Б. Роль биореакторной технологии в тканевой инженерии для клинического использования и разработки терапевтических мишеней. Биоинженерия. 2018; 5:32. DOI: 10.3390 / bioengineering5020032. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 3. Мартин И., Вендт Д., Хеберер М. Роль биореакторов в тканевой инженерии. Trends Biotechnol. 2004. 22: 80–86. DOI: 10.1016 / j.tibtech.2003.12.001. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 4. Краббе А., Лю Ю., Саркер С.Ф., Боненфант Н.Р., Баррила Дж., Борг З. Д., Ли Дж. Дж., Вайс Д. Дж., Никерсон К. А. Рекеллюляризация децеллюляризованных каркасов легких усиливается динамической суспензионной культурой. PLoS ONE. 2015; 10: e0126846. DOI: 10.1371 / journal.pone.0126846. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 5. Пауэрс М.Дж., Доманский К., Кааземпур-Мофрад М.Р., Калези А., Капитано А., Упадхьяя А., Курзавски П., Вак К.Е., Штольц Д. Б., Камм Р. и др. Микроорганизованный массивный биореактор для перфузии трехмерной культуры печени. Biotechnol. Bioeng.2002; 78: 257–269. DOI: 10.1002 / бит.10143. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 6. Carrier R.L., Rupnick M., Langer R., Schoen F.J., Freed L.E., Vunjak-Novakovic G. Перфузия улучшает тканевую архитектуру сконструированной сердечной мышцы. Tissue Eng. 2002. 8: 175–188. DOI: 10.1089 / 107632702753724950. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 7. Шекаран А., Лам А., Сим Э., Джиалинг Л., Цзян Л., Вен Дж. Т., Чан Дж. К., Чулани М., Реувени С., Берч В. и др. Биоразлагаемые микроносители PCL, покрытые ECM, поддерживают масштабируемую раннюю экспансию МСК человека и формирование кости in vivo.Цитотерапия. 2016; 18: 1332–1344. DOI: 10.1016 / j.jcyt.2016.06.016. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 8. Болл О., Нгуен Б. Н., Плакон Дж. К., Фишер Дж. П. Трехмерные печатные сосудистые сети повышают жизнеспособность перфузионного биореактора большого объема. Анна. Биомед. Англ. 2016; 44: 3435–3445. DOI: 10.1007 / s10439-016-1662-у. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 9. Meinert C., Schrobback K., Hutmacher D.W., Klein T.J. Новая биореакторная система для двухосной механической нагрузки улучшает свойства тканеинженерного хряща человека.Sci. Отчет 2017; 7: 16997. DOI: 10.1038 / s41598-017-16523-х. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 10. Ницер С., Баур Ф., Зибер С. Имитация метастазов, включая строму опухоли: новый метод создания трехмерной модели колоректального рака на основе биологического децеллюляризованного кишечного каркаса. Tissue Eng. Часть C Методы. 2016; 22: 621–635. DOI: 10.1089 / ten.tec.2015.0557. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 11. Карлини М.Дж., Де Лоренцо М.С., Пуричелли Л.Перекрестное взаимодействие между опухолевыми клетками и микросредой в метастатической нише. Curr. Pharm. Biotechnol. 2011; 12: 1900–1908. DOI: 10,2174 / 1381798377058. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 12. Вертрис Р.А., Джордан Дж. М., Солли Т., Гудвин Т. Модели тканевых культур. Основные понятия Мол. Патол. 2009. 2: 159–182. DOI: 10.1007 / 978-0-387-89626-7_18. [CrossRef] [Google Scholar] 13. Moher D., Liberati A., Tetzlaff J., Altman D.G., PRISMA Group Предпочтительные элементы отчетности для систематических обзоров и метаанализов: заявление PRISMA.Анна. Междунар. Med. 2009; 151: 264–269. DOI: 10.7326 / 0003-4819-151-4-200

    0-00135. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 14. Ouzzani M., Hammady H., Fedorowicz Z., Elmagarmid A. Rayyan — веб-приложение и мобильное приложение для систематических обзоров. Syst. Ред. 2016; 5: 210. DOI: 10.1186 / s13643-016-0384-4. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 15. Розенцвейг Д.Х., Гаври Р., Мойр Дж., Бекман Л., Эглин Д., Штеффен Т., Раули П.Дж., Уэллет Дж. А., Хаглунд Л. Динамическая нагрузка, поддержание матрикса и клеточная инъекционная терапия межпозвонковых дисков человека, культивируемых в биореакторе.Евро. Cells Mater. 2016; 31: 26–39. DOI: 10.22203 / eCM.v031a03. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 16. Лэдд М.Р., Ли С.Дж., Атала А., Ю Дж.Дж. Биореактор сохранял живую матрицу кожи. Tissue Eng. Часть A. 2009; 15: 861–868. DOI: 10.1089 / ten.tea.2008.0195. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 17. Айянгар А.К., Виванко Дж., Ау А.Г., Андерсон П.А., Смит Э.Л., Плоег Х.Л. Зависимость анизотропии губчатой ​​кости поясничного отдела позвоночника человека от кажущейся плотности на основе количественной компьютерной томографии. J. Biomech.Англ. 2014; 136: 0

    . DOI: 10,1115 / 1,4027663. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 18. Вальтер Б.А., Иллиен-Юнгер С., Нассер П.Р., Хехт А.С., Ятридис Дж. Разработка и проверка биореакторной системы для динамической нагрузки и механической характеристики целых межпозвоночных дисков человека в культуре органов. J. Biomech. 2014; 47: 2095–2101. DOI: 10.1016 / j.jbiomech.2014.03.015. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 19. Марголис Л., Хатфилл С., Чуаки Р., Воке К., Эммерт-Бак М., Линехан В.М., Duray P.H. Долгосрочная органная культура ткани предстательной железы человека в биореакторе с вращающейся стенкой, разработанном НАСА. J. Urol. 1999; 161: 290–297. DOI: 10.1016 / S0022-5347 (01) 62134-7. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 20. Ликато Л., Прието Г., Гримм Э. Новая доклиническая модель злокачественной меланомы человека с использованием сосудов с вращающимися стенками биореактора. Vitr. Клетка. Dev. Биол. Anim. 2001. 37: 121–126. DOI: 10.1290 / 1071-2690 (2001) 037 <0121: ANPMOH> 2.0.CO; 2. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 21. Дюрей П.Х., Инь С.Р., Ито Ю., Безруков Л., Кокс К., Чо М.С., Фицджеральд В., Дорвард Д., Циммерберг Дж., Марголис Л. Инвазия Borrelia burgdorferi в человеческие ткани ex vivo. J. Infect. Дис. 2005; 191: 1747–1754. DOI: 10,1086 / 429632. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 22. Феррарини М., Стеймберг Н., Понзони М., Беллони Д., Беренци А., Гирланда С., Калигарис-Каппио Ф., Маццолени Г., Ферреро Э. Динамическое трехмерное культивирование ex-vivo тканей человека в Биореактор RCCS ™ позволяет изучать биологию множественной миеломы и реакцию на терапию.PLoS ONE. 2013; 8: e71613. DOI: 10.1371 / аннотация / d7d8e0a7-aa3d-4620-98e5-c5a7bbf31dc8. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 23. Дрю Дж.Э., Фаркухарсон А.Дж., Вейз Х., Кэри Ф.А., Стил Р.Дж., Росс Р.А., Бантон Д.С. Молекулярное профилирование мультиплексированных генных маркеров для оценки жизнеспособности культур Ex vivo эксплантата толстой кишки человека. Biores. Открытый доступ. 2015; 4: 425–430. DOI: 10.1089 / biores.2015.0029. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 24. Пейш Х.Л., Рид Л.Х., Браун Х., Bryan M.C., Govaere O., Leslie J., Barksby B.S., Garcia Macia M., Watson A., Xu X. и др. Технология биореактора для моделирования фиброза в прецизионных срезах печени человека и грызунов. Гепатология. 2019; 70: 1377–1391. DOI: 10.1002 / hep.30651. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 25. Суровец С.М., Конклин Б.С., Ли Дж.С., Лин П.Х., Вайс В.Дж., Ламсден А.Б. Новая система перфузионных культур, используемая для исследования вены человека. J. Surg. Res. 2000; 88: 34–41. DOI: 10.1006 / jsre.1999.5759. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 26.Strehl R., Tallheden T., Sjogren-Jansson E., Minuth W.W., Lindahl A. Долгосрочное сохранение суставного хряща человека в культуре для тестирования биоматериала. Биоматериалы. 2005; 26: 4540–4549. DOI: 10.1016 / j.biomaterials.2004.11.037. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 27. Cheah L.T., Dou Y.H., Seymour A.M., Dyer C.E., Haswell S.J., Wadhawan J.D., Greenman J. Микрожидкостная перфузионная система для поддержания жизнеспособности сердечной ткани с электрохимическим мониторингом активных форм кислорода в реальном времени. Лабораторный чип.2010. 10: 2720–2726. DOI: 10.1039 / c004910g. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 28. Midwoud P.M., Merema M.T., Verpoorte E., Groothuis G.M. Microfluidics позволяет проводить мелкомасштабные исследования метаболизма лекарственных средств на тканевой основе с ограниченным количеством тканей человека. J. Lab. Автомат. 2011; 16: 468–476. DOI: 10.1016 / j.jala.2011.07.003. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 29. Атач Б., Вагнер И., Хорланд Р., Лаустер Р., Маркс У., Тоневицкий А.Г., Азар Р.П., Линднер Г. Кожа и волосы на чипе: модели кожи in vitro в сравнении с поддержанием тканей ex vivo с динамической перфузией .Лабораторный чип. 2013. 13: 3555–3561. DOI: 10.1039 / c3lc50227a. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 30. Астольфи М., Пеант Б., Латиф М.А., Руссе Н., Кендалл-Дюпон Дж., Кармона Э., Моне Ф., Саад Ф., Провенчер Д., Мес-Массон А.М. и др. Микро-рассеченные опухолевые ткани на чипе: метод ex vivo для тестирования лекарств и индивидуальной терапии. Лабораторный чип. 2016; 16: 312–325. DOI: 10.1039 / C5LC01108F. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 31. Перрард М.Х., Серени Н., Шлут-Болард К., Блондет А., Дестен С.Г., Плоттон И., Морель-Журнель Н., Лежен Х., Дэвид Л., Дюран П. Полный сперматогенез человека и крысы Ex vivo из свежей или замороженной ткани яичка. Биол. Репродукция. 2016; 95: 89. DOI: 10.1095 / биолрепрод.116.142802. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 32. Мураро М.Г., Мюнст С., Меле В., Квальята Л., Иеззи Г., Цанков А., Вебер В.П., Спаньоли Г.С., Сойсал С.Д. Ex-vivo оценка лекарственного ответа на первичную ткань рака молочной железы с сохраненной микросредой. Онкоиммунология. 2017; 6: e1331798. DOI: 10.1080 / 2162402X.2017.1331798. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 33. Piola M., Ruiter M., Vismara R., Mastrullo V., Agrifoglio M., Zanobini M., Pesce M., Soncini M., Fiore G.B. Полная имитация коронарной гемодинамики для стимуляции ex-vivo подкожных вен человека. Анна. Биомед. Англ. 2017; 45: 884–897. DOI: 10.1007 / s10439-016-1747-7. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 34. Бауэр Р., Грин В.Л., Кувшинова Е., Кувшинов Д., Карсай Л., Крэнк С.Т., Стаффорд Н.Д., Гринман Дж. Сохранение опухоли головы и шеи на чипе: путь к индивидуальному лечению? Future Sci.О.А. 2017; 3: ФСО174. DOI: 10.4155 / fsoa-2016-0089. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 35. Родригес А.Д., Горовиц Л.Ф., Кастро К., Кенерсон Х., Бхаттачарджи Н., Ганде Г., Раман А., Моннат Р.Дж., Йунг Р., Ростомили Р.С. и др. Микрожидкостная платформа для функционального тестирования противораковых препаратов на срезах интактных опухолей. Лабораторный чип. 2020; 20: 1658–1675. DOI: 10.1039 / C9LC00811J. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 36. Райли А., Грин В., Чеа Р., Маккензи Г., Карсай Л., England J., Greenman J. Новое микрофлюидное устройство, способное хранить функциональные образцы карциномы щитовидной железы ex vivo, обеспечивает новую платформу для скрининга лекарственных средств. BMC Рак. 2019; 19: 259. DOI: 10.1186 / s12885-019-5465-z. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 38. Рингер С. О влиянии каждого из компонентов крови на сокращение желудочка. J. Physiol. 1882; 3: 380–393. DOI: 10.1113 / jphysiol.1882.sp000111. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 39.Rouwkema J., Koopman B., Blitterswijk C., Dhert W., Malda J. Поставка питательных веществ в клетки в искусственных тканях. Biotechnol. Genet. Англ. Ред. 2009; 26: 163–178. DOI: 10.5661 / bger-26-163. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 40. Льюис М., МакАртур Б., Мальда Дж., Петет Г., Пожалуйста, С. Гетерогенная пролиферация в созданной хрящевой ткани: роль давления кислорода. Biotechnol. Bioeng. 2005. 91: 607–615. DOI: 10.1002 / бит.20508. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 41. Мальда Дж., Роукема Дж., Мартенс Д.Е., Ле Конт Е.П., Кой Ф.К., Трампер Дж., Ван Блиттерсвейк С.А., Рисл Дж. Кислородные градиенты в тканеинженерных хрящевых конструкциях PEGT / PBT: Измерение и моделирование. Biotechnol. Bioeng. 2004; 86: 9–18. DOI: 10.1002 / бит.20038. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 42. Мальда Дж., Вудфилд Т. Б., ван дер Влодт Ф., Кой Ф. К., Мартенс Д. Э., Трампер Дж., Ван Блиттерсвейк К. А., Рисл Дж. Влияние архитектуры каркаса PEGT / PBT на градиенты кислорода в тканевых хрящевых конструкциях. Биоматериалы.2004. 25: 5773–5780. DOI: 10.1016 / j.biomaterials.2004.01.028. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 43. Рональдсон-Бушар К., Вуньяк-Новакович Г. Органы на чипе: ускоренный путь создания искусственных тканей человека в разработке лекарств. Стволовая клетка клетки. 2018; 22: 310–324. DOI: 10.1016 / j.stem.2018.02.011. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 44. Кастильо-Леон Дж. Лабораторные устройства на кристалле и системы микро-общего анализа. Springer; Чам, Швейцария: 2014. Микрожидкостные и лабораторные устройства: история и проблемы; стр.1–15. [CrossRef] [Google Scholar] 45. Цамандурас Н., Чен В.Л.К., Эдингтон К.Д., Стокс С.Л., Гриффит Л.Г., Сирит М. Интегрированные микрофизиологические системы кишечника и печени для количественных фармакокинетических исследований in vitro. AAPS J. 2017; 19: 1499–1512. DOI: 10.1208 / s12248-017-0122-4. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 46. Лоу Л.А., Маммери К., Берридж Б.Р., Остин К.П., Тагле Д.А. Органы на чипах: в ближайшее десятилетие. Nat. Rev. Drug Discov. 2021; 20: 345–361. DOI: 10.1038 / s41573-020-0079-3.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 47. Ву К., Лю Дж., Ван X., Фэн Л., Ву Дж., Чжу X., Вэнь В., Гон X. Орган на чипе: недавние открытия и перспективы на будущее. Биомед. Англ. Онлайн. 2020; 19: 9. DOI: 10.1186 / s12938-020-0752-0. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 48. Edington C.D., Chen W.L.K., Geishecker E., Kassis T., Soenksen L.R., Bhushan B.M., Freake D., Kirschner J., Maass C., Tsamandouras N., et al. Взаимосвязанные микрофизиологические системы для количественных биологических и фармакологических исследований.Sci. Отчет 2018; 8: 4530. DOI: 10.1038 / s41598-018-22749-0. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 49. Оляга К., Бернабини К., Смит А.С., Сринивасан Б., Джексон М., МакЛэмб В., Платт В., Бриджес Р., Кай Ю., Сантханам Н. и др. Демонстрация многоорганной токсичности в функциональной системе человека in vitro, состоящей из четырех органов. Sci. Отчет 2016; 6: 20030. DOI: 10,1038 / srep20030. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 50. Чжан Ю.С., Арнери А., Берсини С., Шин С.Р., Чжу К., Голи-Малекабади З., Алеман Дж., Колози К., Бусиньяни Ф., Делл’Эрба В. и др. Биопечать 3D микроволоконных каркасов для инженерии эндотелиализированного миокарда и сердца на чипе. Биоматериалы. 2016; 110: 45–59. DOI: 10.1016 / j.biomaterials.2016.09.003. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 51. Duzagac F., Saorin G., Memeo L., Canzonieri V., Rizzolio F. Микрожидкостные органоиды на чипе: квантовый скачок в исследованиях рака. Раки. 2021; 13: 737. DOI: 10.3390 / Cancers13040737. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 52.Schuster B., Junkin M., Kashaf SS, Romero-Calvo I., Kirby K., Matthews J., Weber CR, Rzhetsky A., White KP, Tay S. Автоматизированная микрофлюидная платформа для динамического и комбинаторного скрининга опухолевых органоидов на наркотики . Nat. Commun. 2020; 11: 5271. DOI: 10.1038 / s41467-020-19058-4. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 53. Ли З., Ю. Л., Чен Д., Мэн З., Чен В., Хуанг В. Протокол создания органоидов аденокарциномы легких из клинических образцов. STAR Protoc. 2020; 2: 100239. DOI: 10.1016 / j.xpro.2020.100239. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 54. Деккерс Дж. Ф., ван Влит Э. Дж., Сакс Н., Розенблют Дж. М., Коппер О., Ребел Х. Г., Веренс Э. Дж., Пиани К., Висвадер Дж. Э., Вериссимо К. С. и др. Долгосрочное культивирование, генетические манипуляции и ксенотрансплантация нормальных органоидов человека и рака груди. Nat. Protoc. 2021; 16: 1936–1965. DOI: 10.1038 / s41596-020-00474-1. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 55. Веласко В., Шариати С.А., Эсфандьярпур Р.Методы построения моделей органоидов на основе микротехнологий. Микросист. Nanoeng. 2020; 6: 76. DOI: 10.1038 / s41378-020-00185-3. [CrossRef] [Google Scholar] 57. Берридж М.Дж. Путь передачи сигналов трифосфата инозита / кальция в здоровье и болезнях. Physiol. Ред. 2016; 96: 1261–1296. DOI: 10.1152 / Physrev.00006.2016. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 58. Гарсия-Монтеро А., Вассер С., Малло Г. В., Субейран П., Дагорн Дж. К., Иованна Дж. Л. Экспрессия индуцированной стрессом мРНК р8 временно активируется после смены культуральной среды.Евро. J. Cell Biol. 2001. 80: 720–725. DOI: 10.1078 / 0171-9335-00209. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 59. Cioffi M., Küffer J., Ströbel S., Dubini G., Martin I., Wendt D. Вычислительная оценка распределения кислорода и напряжения сдвига в системах трехмерной перфузионной культуры: макромасштабные и микроструктурированные модели. J. Biomech. 2008; 41: 2918–2925. DOI: 10.1016 / j.jbiomech.2008.07.023. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 60. Чжан Ю.С., Алеман Дж., Шин С.Р., Килич Т., Ким Д., Мусави Шаег С.А., Масса С., Риахи Р., Чае С., Ху Н. и др. Интегрированная с мультисенсором платформа «органы на чипе» для автоматического и непрерывного мониторинга поведения органоидов на месте. Proc. Natl. Акад. Sci. СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ. 2017; 114: E2293 – E2302. DOI: 10.1073 / pnas.1612

    4. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

    VEV: Viva Ex Vivo Review

    Я всегда любил науку. Я помню, как меня поразили переиздания книги Карла Сагана « Космос: личное путешествие », и я отчетливо помню, как впервые использовал микроскоп в школе.Я был ошеломлен тем, как мельчайшие предметы могут содержать столько жизни и как везде есть чему поучиться.

    VEV: Viva Ex Vivo стремится исследовать это детское любопытство по поводу открытия скрытой сложности микробиологии. Он делает это, позволяя игрокам пилотировать VEV ​​(который, несмотря на субтитры игры, фактически означает Virtual Eukaryote Visualizer) через эти микросреды. Игра охватывает как пресную воду, так и спинномозговую жидкость, и позволяет игрокам исследовать различные типы образцов, знакомых и чужеродных по природе.

    Но это игра, поэтому, конечно, у игроков есть цель, которую они должны достичь. Завершение уровня осуществляется путем продления максимального срока службы VEV, который составляет 30 минут. Чтобы продержаться так долго, игрокам нужно будет питать свой организм, собирая кластеры питательных веществ, которые плавают вокруг (в противном случае у вас закончится энергия), и избегать опасных врагов, которые могут мгновенно их уничтожить.

    Если это звучит просто, то это потому, что это так. У нас нет другой цели, просто собирайте питательные вещества, чтобы выжить.К сожалению, эта механика не настолько интересна, чтобы на ее основе была техническая демонстрация, не говоря уже о полном продукте. Мне потребовалось всего пять минут слепого плавания вокруг первой ступени, пока мне не стало скучно, и я захотел двигаться дальше.

    Ужасно скучно — это лишь первая проблема VEV . Как упоминалось ранее, игрокам приходится практически вслепую плавать в поисках питательных веществ. На экране нет индикатора или радара, который укажет вам правильное направление, вместо этого вам нужно просто двигаться в нужном направлении и надеяться, что вы столкнетесь с ним.Дистанция втягивания в игре ужасна, и кластеры часто появлялись после того, как я смотрел прямо на них в течение нескольких минут.

    Другая проблема заключается в том, что простое плавание кажется невероятно неудобным из-за того, что игра не позволяет игроку использовать правый аналоговый джойстик для изменения положения камеры. Поскольку камера движется автоматически вместе с самим VEV, это очень дезориентирует игру. Я часто терял ориентировку в том направлении, в котором я направлялся, поскольку то, что когда-то было вверху, внезапно оказалось подо мной.Несмотря на то, что я провел часы с VEV: Viva Ex Vivo , управлять своим кораблем никогда не казалось естественным.

    Неспособность перемещать камеру также имеет некоторые последствия для игрового процесса. Есть враги, которые будут преследовать ваш корабль, но это совершенно не учитывается игроком, так как невозможно оглядываться. Чтобы проверить, есть ли что-то у вас на хвосте, вам нужно сбросить скорость и повернуть на 180 градусов. Поразительно, но замедление — именно то, что нужно врагам, чтобы поймать вас.Часто они могут уничтожить ваш VEV за одну атаку, что делает 30-минутный гол еще более нелепым.

    Еще хуже то, что простой механизм сбора кластеров сложнее, чем должен быть. У вашего VEV абсолютно отсутствует гравитационное притяжение, а это значит, что вам придется выстроить крошечный организм прямо перед тем, что вы пытаетесь собрать. Это означает, что очень легко пропустить кластер и нужно замедлиться до полной остановки, чтобы попасть в цель. В конце концов я научился замедлять скорость и регулировать ее, но на удивление сложно осуществить то, что должно быть предельно простым.

    VEV также имеет ужасный пользовательский интерфейс из-за того, что он постоянно перемещается по экрану. Когда вы двигаетесь медленно, вы действительно можете читать это прямо перед собой. Когда вы ускоряетесь, он наклоняется и уносится далеко. Пользовательский интерфейс теоретически должен эффективно передавать важную информацию игроку, чтобы он мог уловить все, что происходит, одним взглядом. Вместо этого VEV пытается помешать игроку сделать что-то столь же простое, как проверка того, сколько у него энергии.Фактически, они даже посвятили целую кнопку изменению интерфейса игры. Подсказка: если вам нужно тратить кнопку DualShock 4 на изменение положения вокруг HUD, вам необходимо изменить ее дизайн.

    В не очень забавной заметке Viva Ex Vivo появляется экран окончания игры, где пользовательский интерфейс находится в момент смерти. Таким образом, если он уменьшен, вы даже не сможете прочитать пункты меню, из которых нужно выбирать. Шутки в сторону. Взгляните на первый слайд ниже и поймите, какой это кошмар доступности (который усугубляется еле разборчивым экраном управления).

    Strawberry Swing

    В дополнение к его проблемам, в VEV не так много уровней, которые можно было бы проверить. Есть только семь образцов, которые нужно проверить, и почти половина из них заблокирована до тех пор, пока игрок не выполнит определенные критерии (что, к сожалению, не указывает, какие именно). На уровни приятно смотреть, по крайней мере, в течение пяти минут или около того игровой процесс кажется относительно свежим. Уровень, основанный на крови, был особенно впечатляющим, поскольку вы можете пролететь мимо огромных клеток крови. Просто надейтесь, что вы случайно не прикоснетесь к одному из них, так как он заставит ваш VEV вращаться, а камера сойдет с ума.

    Несмотря на то, что разработчик назвал игровой процесс VEV «выживанием в аркадном стиле», мало пользы в том, чтобы продержаться полные 30 минут или собрать как можно больше питательных веществ. Конечно, в главном меню указан ваш наивысший балл, но вы даже не можете сравнивать баллы с результатами друзей. Нет никаких таблиц лидеров или каких-либо оснований для оправдания прохождения любого из этих уровней более одного раза.

    Простые дизайнерские решения, такие как сокращение продолжительности этапов или изменение целей, могли бы сделать это гораздо более приятным.Если один режим сосредоточен на сборе питательных веществ, а другой — на выживании после нападения врага, это могло бы добавить некоторой ценности к воспроизведению. Вместо этого мало чем заняться, кроме той же скучной цели, от которой вы устаете в течение первых пяти минут.

    Я абсолютно восхищаюсь концепцией VEV: Viva Ex Vivo , которая только еще больше меня разочаровала в финальном выпуске. Изучение этих различных предметных стекол микроскопа должно быть захватывающим, но вместо этого игроки остаются разочарованными из-за неудобного управления и скучают из-за того, что мало что нужно сделать.Здесь есть потенциал, и мы надеемся, что виртуальная реальность поможет привлечь внимание пользователей, но в ее нынешнем виде мало что можно порекомендовать.


    Код проверки для VEV: Viva Ex Vivo предоставлен издателем. Проверено на PlayStation 4. Для получения дополнительной информации о подсчете очков ознакомьтесь с нашей Политикой проверки здесь.

    3,0

    • Отличная концепция
    • Визуальные эффекты выглядят неплохо
    • Чрезвычайно скучно
    • Плохое расстояние прорисовки
    • 3

    • Плохое расстояние прорисовки трансплантация культивированных эпителиальных клеток слизистой оболочки полости рта при недостаточности лимбальных стволовых клеток: обзор | Исследование и терапия стволовыми клетками

      Повреждение лимба может привести к снижению количества лимбальных эпителиальных стволовых клеток (LESC) и нарушению гомеостаза эпителия роговицы.Эта недостаточность, называемая дефицитом лимбальных стволовых клеток (LSCD) [1,2,3], приводит к нарушению барьерной функции и инвазии клеток конъюнктивы на поверхность роговицы [4, 5]. Конъюнктивализация сопровождается васкуляризацией, хроническим воспалением, светобоязнью, повторяющейся болью и снижением зрения [4, 6,7,8]. LSCD классифицируется как частичный или тотальный и может возникать односторонне или двусторонне [9].

      Конъюнктивальный лимбальный аутотрансплантат (CLAU) и трансплантация культивированного лимбального эпителия (CLET) — это процедуры, часто используемые при лечении односторонних LSCD [10, 11].Однако у пациентов с двусторонним тотальным LSCD нет тканей лимб, доступных для использования ни в CLAU, ни в CLET. Таким образом, варианты источника LESC ограничены живыми или трупными донорами и влекут за собой использование иммуносупрессии для предотвращения отторжения [12].

      В 2004 году Накамура и его сотрудники выполнили первую трансплантацию аутологичных эпителиальных клеток ротовой полости, культивированных ex vivo на амниотической мембране человека (AM), чтобы предложить альтернативу использованию аллогенной ткани и избежать иммуносупрессии [13].Лечение LSCD с использованием трансплантации культивируемых ex vivo эпителиальных клеток слизистой оболочки полости рта (COMET) сводит к минимуму риск отторжения трансплантата и имеет дополнительное преимущество, заключающееся в том, что при необходимости его можно повторить. Однако неоангиогенез после трансплантации является недостатком, связанным с этой процедурой [13]. В этом обзоре суммируются клинические результаты серии случаев COMET с 2004 по 2019 год и рассматриваются методы, использованные при подготовке трансплантированных клеточных листов.

      Общий анализ исследований

      Обзор был подготовлен путем поиска в базе данных Ovid MEDLINE с использованием поисковых терминов: limbus corneae, limbus, лимбальные стволовые клетки, эпителий роговицы, роговица, слизистая оболочка рта и трансплантация.Мы нашли 24 исследования, опубликованных за последние пятнадцать лет [13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,25,26,27,28,29,30,31,32 , 33,34,35,36]. История болезни одного пациента (один глаз) была исключена из этого обзора [37].

      COMET было выполнено в Японии [13,14,15,16,17,18,19, 23,24,25, 27, 29, 30], Тайване [20, 21, 28], Индии [22], Франция [26], Великобритания [31], Польша [32], Таиланд [33], Иран [34], Южная Корея [35] и Китай [36]. Всего было включено 343 глаза 315 пациентов (64% мужчин и 36% женщин).Возрастной диапазон составлял от восьми до 86 лет, средний возраст составлял 46,5 (± 18,6) и 50,8 (± 21,5) лет для мужчин и женщин, соответственно. Около 26% пациентов мужского пола и 23% женщин были моложе 30 лет, а около 28% и приблизительно 45%, соответственно, были старше 60 лет.

      Триста двадцать глаз LSCD были классифицированы как полностью дефектные, восемь глаз — как неполные [32, 33]. Одно исследование классифицировало все 5 глаз как тяжелые LSCD [21]. В девять исследований были включены пациенты с двусторонним LSCD [13, 14, 15, 16, 19, 26, 31, 33, 34], в два исследования были включены как двусторонние, так и односторонние случаи [22, 30], а в одно исследование были включены только пациенты с односторонним LSCD. [25].

      Пациенты и хирургия

      Этиология

      Наиболее распространенной этиологией LSCD является ожог роговицы (146/343 глаз; 42,6%), вызванный химическими, термическими или неуточненными причинами, за которым следует синдром Стивенса-Джонсона (SJS) (92/343 глаза; 26,8%) (рис. 1 и табл. 1). Глазной рубцовый пемфигоид (OCP) и псевдоокулярный рубцовый пемфигоид (pOCP) вместе составляют третью наиболее частую причину LSCD, получающую COMET (44/343 глаза; 12,8%).

      Рис. 1

      Этиология дефицита лимбальных стволовых клеток (LSCD).Процентное соотношение зависит от количества глаз. ОКП, глазной рубцовый пемфигоид; pOCP, псевдоокулярный рубцовый пемфигоид; SJS, синдром Стивенса-Джонсона. * Разное (%): трахома (1,45), посткератит (1,45), идиопатический (1,2), синдром Лайелла (1,2), розацеа-кератит (0,9), врожденная аниридия (0,6), гипоксия контактных линз + врожденная аниридия (0,6), нейропаралитический кератит (0,6), болезнь Бехчета (0,6), реакция трансплантат против хозяина (0,6), плоскоклеточный рак (0,6), студенистая каплевидная дистрофия (0.3), множественная хирургия глаза (0,3), развитый птеригиум (0,3), глазная травма (0,3), гипоксия контактных линз (0,3), цистиноз (0,3), тяжелая дистрофия Греноу (0,3), гепатит С (0,3), лучевая кератопатия ( 0,3), дегенерация роговицы Зальцмана (0,3) и токсичность препарата (0,3)

      Таблица 1 Резюме клинических исследований
      Диагноз

      Диагностика LSCD основана на следующих клинических признаках: неровная поверхность роговицы с потерей светового рефлекса, роговица непрозрачность эпителия, потеря лимбальных палисадов Фогта, окрашивание флуоресцеином, истончение эпителия в виде вихревого рисунка, неоваскуляризация роговицы, периферический паннус, стойкий эпителиальный дефект (PED), рубцевание стромы роговицы и помутнение [6, 38].

      Конъюнктивализация роговицы может быть подтверждена клинически с помощью конфокальной микроскопии in vivo (IVCM) для определения фенотипа клеток на роговице (эпителиальные клетки конъюнктивы гиперрефлективны с яркими ядрами и нечеткими границами, тогда как эпителиальные клетки роговицы хорошо определены с яркими границы и темная цитоплазма) [39]. Ткань конъюнктивы содержит бокаловидные клетки (GC) и кровеносные сосуды, которые также можно увидеть с помощью IVCM [39]. Цитология оттиска (ИК) — еще один метод, используемый для обнаружения ГК на поверхности роговицы [4].В случае отсутствия ГК из-за серьезного повреждения глазной поверхности муцины конъюнктивы (но не роговицы) (муцин 1) [40] или кератины (кератин 7, -13 и -15) могут быть обнаружены с помощью иммуноцитохимии [41, 42, 43 ]. Клинические признаки использовались для диагностики LSCD в 18/24 исследованиях [13,14,15,16, 19, 22,23,24,25,26,27, 29,30,31,32,33, 35, 36] , пять из этих исследований также использовали IC (таблица 1) [19, 23, 31, 33, 36].

      Предоперационные рекомендации

      В некоторых исследованиях сообщалось о предыдущих операциях, включая трансплантацию AM (38 глаз) [13, 15, 20, 21, 22, 28, 30, 35] и проникающую кератопластику (PKP) (8 глаз) [ 14,15,16, 20, 21, 34, 35] или другое (57 глаз) [29, 36].Более того, 21 глаз ранее подвергался трансплантации CLAU или аллотрансплантата [13, 14, 15, 18, 19, 20, 21, 22, 35]. Всего было сообщено о 148 ранее проведенных операциях. Таким образом, количество ранее обработанных глаз составило 119, что составляет более трети (34,7%) от общего количества глаз, включенных в этот обзор [13,14,15,16, 18,19,20,21,22, 28, 29,30, 34,35,36].

      Факторы прогноза

      Наличие предоперационных эпителиальных дефектов и / или плохого слезоотделения может повлиять на успешный результат [23, 44, 45].Таким образом, многочисленные исследования включали оценку синдрома сухого глаза в предоперационную оценку (таблица 1) [13,14,15,16,17, 22,23,24, 27, 31, 33, 34]. DeSousa et al. рекомендуют перед операцией оценить и исправить аномалии придатков, включая здоровье и функцию век, свода и слезной пленки, чтобы обеспечить наилучшие шансы на заживление эпителия [46]. Мазок с конъюнктивы выявил присутствие патогенных организмов, что, вероятно, связано с плохой глазной поверхностью и отсутствием слезной пленки.Поэтому рекомендуется выполнить посев мазка из конъюнктивы перед COMET, чтобы убедиться, что поверхность глаза восприимчива [47]. Также рекомендуется пройти полное обследование полости рта, поскольку на успешное культивирование листов эпителиальных клеток слизистой оболочки полости рта (OMEC) могут влиять плохая гигиена полости рта и курение [15, 34].

      Хирургия

      Хирургическая техника во всех исследованиях была одинаковой. Сначала с поверхности роговицы удаляли ткань конъюнктивы на расстоянии до 3 мм от лимба, чтобы обнажить строму роговицы [14, 17, 26].При необходимости выполняли рассечение симблефарона, а в некоторых случаях AM пересаживали на голую склеру для реконструкции свода конъюнктивы [17, 29, 30, 35]. В нескольких случаях субконъюнктивальное пространство обрабатывали Митомицином С [13, 15, 16, 17, 19, 22, 24, 27, 33]. Культивированный лист OMEC размером от 14 [32] до 23,4 [14] мм в диаметре переносили на поверхность роговицы. В большинстве исследований для фиксации трансплантата на месте использовались швы [13, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32. , 33,34, 36].Нити не применялись, если клеточный лист был без носителя [14, 26, 27, 35]. В одном исследовании также использовался тканевый адгезивный клей [33], в одном — фибриновый клей плюс временная тарзоррафия [35], а в другом — латеральная тарзоррафия [34].

      После операции, AM [31] или терапевтических контактных линз (CL) [13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,25,26,27,28,29 , 30,31,32,33,34,35,36] обычно применялись в течение 1 месяца [20, 29, 30] или до 3 месяцев [24, 36] для защиты трансплантата. В одном исследовании сообщалось о побочных эффектах, связанных с гипоксией, вызванной длительным использованием КЛ [26].

      Послеоперационные соображения

      Послеоперационное ведение пациентов в разных исследованиях значительно варьировалось. Было показано, что влажная глазная поверхность после COMET является важным критерием успеха [14, 24]. Это было достигнуто за счет частого применения искусственных слез без консервантов [14, 19, 23, 26, 27, 32,33,34, 36], глазных капель аутологичной сыворотки [19, 21, 23, 31,32,33, 35 , 36] или водоудерживающая гиалуроновая кислота [19, 23, 35]. В одном исследовании слезная точка закрывалась для увеличения задержки слезы [14].Местные антибиотики применялись во всех исследованиях, как правило, от 2 недель [32, 33] до 6 месяцев [22]. Послеоперационное воспаление контролировалось только топическими стероидами [27, 31, 32, 33] или в комбинации с системными стероидами [13, 14, 17, 19, 21, 22, 23, 24, 26, 29, 30, 34, 35,36]. Продолжительность лечения варьировала от 1 недели [14, 26] до 2 месяцев [13, 21, 34]. В двух исследованиях дозозависимость снижалась в зависимости от реакции пациента [29, 30]. В некоторых исследованиях иммуносупрессия в форме циклоспорина [17, 24, 29, 30] или циклофосфамида [13, 21] использовалась для контроля послеоперационного воспаления, а местный такролимус [34] применялся для снижения риска отторжения аллотрансплантата. после ПКП.

      Характеристики протокола культивирования, используемого в клинических исследованиях

      Биопсия

      Наименьший образец ткани был ~ 4,7 мм 2 , получен с помощью биопсийного стержня диаметром 3 мм [31], наибольший — от 120 до 200 мм. 2 (Таблица 2) [35]. В четырнадцати исследованиях использовалась ткань слизистой оболочки щеки [14, 19, 21, 22, 23, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 36], а в двух — губы [34, 35].

      Таблица 2 Размер и расположение биопсии слизистой оболочки полости рта, использованной в COMET
      Методы культивирования

      Суспензия клеток была наиболее распространенной системой культивирования (23 исследования), в которой отдельные OMEC высвобождались из ткани с помощью ферментативной обработки (Таблица 3) [13 , 14,15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,25,26,27,28,29,30, 32,33,34,35,36].Все культуры суспензий клеток, кроме одной [33], сообщили о стандартном использовании фибробластов мышей 3T3 в сокультуре в качестве питающего слоя [13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23,24, 25,26,27,28,29,30, 32, 34,35,36]. Метод эксплантата был исследован в одном исследовании, в котором культура биопсии на AM продемонстрировала более быстрый рост по сравнению с культурой на питающем слое [31]. Работа in vitro также показала, что листы OMEC поддерживают сравнимый фенотип эпителиальных стволовых клеток при культивировании на аутологичных дермальных фибробластах по сравнению с использованием фибробластов мышей 3T3 [48].Время культивирования обычно составляло от 2 до 3 недель; самый короткий — 1 неделя [32]. Нормы надлежащей производственной практики (GMP) соблюдались в четырех исследованиях из Японии [29, 30], Южной Кореи [35] и Великобритании [31].

      Таблица 3 Краткое описание методов культивирования, использованных при подготовке листов OMEC
      Среда

      Среда Игла, модифицированная Дульбекко со смесью HAM F12 (DMEM / F12), использовалась более чем в половине исследований; в десяти из них соотношение DMEM / F12 было 1: 1 [13, 15, 16, 18, 19, 22, 23, 25, 27, 34], а в трех из них 3: 1 (Таблица 3) [31 , 35, 36].В других исследованиях использовалась гормональная эпителиальная среда с добавками (SHEM) [20, 28], среда для роста кератиноцитов (KGM) [17, 24] или бессывороточная среда для роста кератиноцитов (KBM-2) [33].

      Фетальная телячья сыворотка (FBS или FCS, когда ее называют «фетальная телячья сыворотка») использовалась в девяти исследованиях [13, 16, 19, 20, 21, 28, 34, 35, 36], в пяти исследованиях использовалась аутологичная сыворотка ( AS) [17, 22, 23, 27, 31], а четыре использовали FBS и AS (таблица 3) [15, 29, 30, 32]. Только у одного не было сыворотки [33]. Использование AS исключает воздействие ксеногенных соединений, содержащихся в сыворотке крови животных.Одно исследование сравнивало использование AS с FBS и обнаружило, что морфология клеточного листа и экспрессия структурных белков были сходными в обеих группах [17]. Предварительная работа in vitro также показала, что AS способствует аналогичной экспрессии предполагаемых маркеров стволовых клеток в культивируемых листах OMEC по сравнению с использованием FBS [31]. У двух пациентов, получавших в этом исследовании культивированные листы OMEC без кормления AS, значительно улучшились целостность эпителия роговицы, облегчение боли и острота зрения (VA) [31].

      Аэролифтинг

      В пятнадцати исследованиях (258 глаз) воздушный подъем использовался для стимулирования образования многослойного эпителия (таблица 3) [13, 15, 16, 17, 18, 19, 23, 24, 25, 27, 29, 30, 32 , 34, 36].Подъем по воздуху произвел большее расслоение с четырьмя-девятью слоями по сравнению с двумя-пятью в листах OMEC, не поднимаемых воздухом. Стратификация способствует межклеточной адгезии между поверхностными эпителиальными клетками за счет образования плотных контактов, что помогает предотвратить потерю трансплантата из-за моргания [49]. С другой стороны, высокодифференцированные листы, поднимаемые воздухом, обладают более низкой пролиферативной функцией, что согласуется с уменьшением количества стволовых клеток, экспрессирующих p63α [50].

      Субстрат

      AM был наиболее распространенным субстратом для культивирования (Таблица 3).В восемнадцати исследованиях использовался оголенный AM (эпителиальный слой удален) [13, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 24, 26, 29, 30, 32, 33, 34, 36], а в одном исследовании использовался неповрежденный AM [31]. Из оставшихся исследований в двух использовались либо обнаженные AM или покрытые фибрином культуральные вставки [23, 27], в двух использовались термочувствительные вставки для клеточных культур [14, 26], а в одном исследовании субстрат не использовался [35].

      Carrier

      В большинстве исследований использовался AM в качестве субстрата для культивирования, и OMEC были перенесены непосредственно на тот же субстрат (таблица 3).В двух исследованиях с использованием термочувствительных вкладышей в культуру клеток клетки переносили на подложку [14] или кольца из поливинилиденфторида [26], которые удаляли после переноса на роговицу. Кольцо из фильтровальной бумаги использовалось для переноса клеточных листов, выращенных на фибриновой подложке [27]. В одном исследовании использовалась поддерживающая сетка с культивированием без субстрата [35].

      Фенотип культивируемых клеток и наличие стволовых клеток в культуре

      Иммуногистохимия и ОТ-ПЦР показали, что культивируемые OMEC положительны по кератину (K) 3, K4 и K13 [13, 14, 17, 21, 26, 31 , 32,33], последний не экспрессируется в эпителии роговицы [51].OMEC также экспрессируют маркеры дифференцировки роговицы коннексин 43, ламинин 5 [52, 53] и предполагаемые маркеры стволовых клеток ß1-интегрин, p75, p63, ABCG2, C / EBPδ [52, 54]. Они не экспрессируют специфичный для роговицы K12 и фактор транскрипции PAX6 [22, 31]. Однако гетерогенные популяции клеток-предшественников и зрелых эпителиальных клеток в эпителии слизистой оболочки полости рта подобны нормальному эпителию роговицы in vivo; таким образом, возможность его использования в качестве функционального эпителия глазной поверхности [55, 56].

      Было показано, что присутствие по крайней мере 3% стволовых клеток (определяемых как ΔNp63α-положительные клетки) связано с клиническим успехом при лечении LSCD с использованием CLET [57].Вероятно, что процент стволовых клеток в привитых листах OMEC также влияет на успех COMET. Nishida et al. показали экспрессию p63 в базальном слое культур OMEC, использованных в успешном лечении четырех пациентов с LSCD (Таблица 3) [14]. Анализ предполагаемых маркеров стволовых клеток (ΔNp63α, ABCG2 и C / EBPδ) в трансплантатах показал, что OMEC и лимбальные клетки имеют сходные уровни экспрессии [31]. В четырех исследованиях использовался анализ эффективности образования колоний (CFE), чтобы показать присутствие стволовых клеток в листах OMEC (таблица 3) [14, 22, 26, 31].На сегодняшний день необходимо исследовать любую корреляцию между содержанием стволовых клеток в листах OMEC до трансплантации и клиническим успехом использования COMET.

      Последующее наблюдение и клинические исходы

      Самый короткий зарегистрированный период наблюдения составил 1 месяц [35]; в двух исследованиях было менее 1 года [26, 35], в десяти исследованиях от 1 до 2 лет [13,14,15,16,17, 19, 22, 30, 32, 36] и в девяти исследованиях от 2 до 3 лет [ 20, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 34]. Только в двух исследованиях наблюдался период наблюдения более 3 лет [24, 28], самый длительный из которых — 7 лет.5 лет (таблица 4) [24].

      Таблица 4 Клинические результаты, осложнения и последующее наблюдение
      Степень успеха

      Клинический успех наиболее последовательно определялся стабильностью поверхности глаза. Сообщалось, что вторичными целями были улучшенная VA и наиболее скорректированная VA (BCVA). Пост-трансплантологические исследования редко включали в себя IVCM [16, 21] или IC [19]. Satake et al. использовали IC, чтобы показать, что в 2/4 глазах фенотип слизистой оболочки полости рта сохранялся до 16 месяцев после операции, а в некоторых случаях оцениваемый эпителий содержал смесь клеток слизистой оболочки полости рта и конъюнктивы [19].

      В целом, 70,8% (172/243) глаз, получавших COMET, достигли стабильной глазной поверхности и были признаны успешными (Таблица 4; см. Рис. 2 для получения подробных результатов по этиологии). Этот процент ниже по сравнению с трансплантацией культивируемых лимбальных эпителиальных клеток (LEC) (75%) [58]. Более того, одно исследование напрямую сравнивало COMET с трансплантацией аллогенной культуральной трансплантации лимбального эпителия (ACLET) и сообщало, что 71,4% (30/42) глаз в группе ACLET достигли стабильной глазной поверхности по сравнению с 52.9% (18/34) глаз в группе COMET. Авторы объясняют значительно более высокий успех использования ACLET более низкой частотой послеоперационных PED, превосходной пролиферацией и дифференцировкой LEC, а также способностью LEC более легко формировать стабильный эпителий роговицы [36].

      Рис. 2

      Результаты по этиологии. ОКП, глазной рубцовый пемфигоид; pOCP, псевдоокулярный рубцовый пемфигоид; SJS, синдром Стивенса-Джонсона. Прочие: развитый птеригиум, болезнь Бехчета, гипоксия контактных линз, гипоксия контактных линз + врожденная аниридия, цистиноз, лекарственная токсичность, студенистая каплеобразная дистрофия, реакция трансплантат против хозяина, гепатит С, идиофатический синдром, синдром Лайелла, хирургия нескольких глаз, нейропаралитическое кератит, травма глаза, посткератит, лучевая кератопатия, розацеа-кератит, дегенерация роговицы Зальцмана, тяжелая дистрофия Гроеноу, плоскоклеточный рак и трахома

      Улучшение зрения

      Улучшение VA было отмечено во всех исследованиях, кроме двух (рис.2 и Таблица 4), а также у 225/331 (68,2%) глаз наблюдалось некоторое улучшение. Улучшение BCVA по крайней мере двух линий было отмечено в 172/271 (63,5%) глазах (данные 20 исследований). Отсутствие или неполное описание методологии измерения VA / BCVA не позволило провести точное сравнение результатов между исследованиями. ВА, непостоянно измеряемая до или после последующих операций, таких как ПКП, была еще одним важным смешивающим фактором.

      Выживание эпителиальных клеток слизистой оболочки полости рта после трансплантации

      Nakamura et al.показали, что образцы после COMET демонстрируют уменьшение количества эпителиальных слоев с 5 до 6 в успешных трансплантатах до 2-5 дезорганизованных эпителиальных слоев в неудачных трансплантатах [18]. Фенотип трансплантатов COMET (оцениваемый по кнопкам роговицы, полученным после вторичной процедуры, в основном PKP), также был исследован, чтобы охарактеризовать различия между успешным (четыре образца) и неудачным (два образца) фенотипом трансплантата [18]. Успешные случаи показали присутствие K3, маркера, общего для эпителия ротовой полости и роговицы, во всех образцах; K12, кератин, специфичный для роговицы, в одном случае показал лишь эпизодическое окрашивание.K4 и K13, маркеры эпителия слизистой оболочки полости рта, присутствовали как в успешных, так и в неудачных образцах. В неудачных образцах один показал случайное окрашивание на K3, но оба были отрицательными на K12. MUC5AC, маркер бокаловидных клеток конъюнктивы [59], присутствовал только в обоих неудачных случаях и отсутствовал в успешных случаях [18].

      Другие исследования также оценивали профиль экспрессии после COMET, но только в успешных случаях. Результаты были аналогичны результатам Накамуры и др., Показав положительное окрашивание на K3, K4, K13 и отрицательное окрашивание на MUC5AC [16, 20, 31, 35].Кроме того, Kim et al. показали, что кератин, специфичный для роговицы, K12, присутствует во всех четырех успешных образцах COMET [35]. Два других исследования показали случайное окрашивание K12, показанное в 2/6 образцах [16, 20]. Эти результаты предполагают, что эпителий после COMET проявляет признаки как роговичного (K12 [+]), так и роговичного фенотипа эпителия слизистой оболочки (K13 [+]). Обнаружение K3 [+], K4 [+], K12 [+], K13 [+] и MUC5AC [-] в клинически успешных трансплантатах показывает, что культивируемые OMEC выживают после трансплантации и продолжают вносить вклад в целостность глазной поверхности [18, 35]) .

      Однако без четкого определения происхождения клеток (донор / хозяин) [60,61,62] трудно четко определить, были ли культивированные OMEC трансдифференцированы в роговичный клон или присутствие эпителиальных клеток роговицы представляет собой распространение и миграцию оставшиеся клетки роговицы. Исследование in vivo на крысах показало, что трансплантированные листы клеток слизистой оболочки полости рта были способны выживать и сохранять стволовые клетки / клетки-предшественники в течение не менее 8 недель после операции, что приводит к долгосрочному успеху трансплантации культивированных OMEC у пациентов с LSCD [63 ].Было высказано предположение, что восстановления невоспалительной среды после операции может быть достаточно, чтобы позволить репопуляцию любых оставшихся клеток роговицы на поверхность глаза и / или возобновить нормальную гомеостатическую функцию остаточными лимбальными стволовыми клетками [64].

      Успех трансплантации стволовых клеток и долгосрочное выживание трансплантата при терапии глазной поверхности зависит не только от характеристик трансплантированных клеток, но и от окружающей микросреды, поскольку она обеспечивает необходимые сигналы, необходимые для поддержания и роста клеток [ 48, 65].Хуанг и др. предполагают, что трансплантированные OMECs могут регулироваться сигналами, исходящими от здоровой стромы, и дифференцироваться по фенотипу роговицы, одновременно поддерживая оральный фенотип [56]. Однако идентификация ключевых факторов, необходимых для обеспечения трансдифференцировки OMEC в фенотип роговицы, все еще требует дальнейших исследований.

      Послеоперационные осложнения

      Наиболее частыми осложнениями, описанными после COMET, были дефекты эпителия (52.8%; 36,1% PED), повышенное внутриглазное давление или глаукома (15%), плавление или перфорация стромы (9,4%) и инфекция (7,2%) (рис. 3). Для сравнения, обзор, обобщающий трансплантацию культивированных LEC (889 глаз), показал, что наиболее частыми послеоперационными осложнениями были кровотечение (8,7%), воспаление (7,5%), а также блефарит и эпителиопатия (4%) [58]. Дефекты эпителия, составляющие более половины осложнений, могут отражать часто более серьезный характер двустороннего диагноза LSCD, который требует альтернативного лечения, такого как COMET.

      Рис. 3

      Послеоперационные осложнения. Внутриглазное давление. * Разное (%): симблефарон (2,2), отторжение эндотелиального трансплантата (2,2), отторжение трансплантата роговицы (1,7), рубцевание стромы или васкуляризация конъюнктивы / стромы (1,7), инфильтрация (1,7), воспаление (1,1), потрошение (1,1) , энтропион (0,6), первичная недостаточность (0,6), дисфункция печени (0,6), лекарственная аллергия (0,6), боль и осложнение трансплантата (0,6), мейбомиева киста (0,6), боль и рецидив роговицы (0.6)

      Следует отметить, что не было единого мнения по определению PED. Например, Накамура и др. считали дефекты эпителия стойкими, если они продолжались более 4 недель [24], тогда как Hirayama et al. [27] определили, что PED возникает через 1 неделю после неэффективности традиционной терапии. В ретроспективном сравнительном исследовании (76 глаз) более высокая частота послеоперационных PED была зарегистрирована в глазах, получавших COMET (9/34 глаза), по сравнению с теми, которые получали ACLET (3/42 глаза) [36]. Несколько исследований указали на связь между частотой послеоперационных и предоперационных ПЭД [15, 23, 36].Также было показано, что трансплантированный эпителий проявляет пониженную барьерную функцию после COMET [19].

      Барадаран-Рафии и др. предполагают, что PKP неизбежен в большинстве случаев LSCD, включающих химические ожоги из-за наличия значительного помутнения роговицы [34]. У пациентов, получавших PKP, улучшилась зрительная функция, и авторы рекомендовали выполнять PKP через несколько месяцев после COMET для достижения наилучших шансов на успех [34].

      Хотя в большинстве исследований отмечалась неоваскуляризация после трансплантации [13,14,15, 17, 20, 21, 24, 26,27,28, 32,33,34, 36], они не определяли это как осложнение процедура.Периферическая неоваскуляризация роговицы в большинстве случаев происходила медленно, в течение первого года после операции [33]. Однако центральную область роговицы обычно щадили, и неоваскуляризация обычно прекращала прогрессировать через 1 год, оставаясь стабильной после этого [14, 33] или постепенно уменьшаясь со временем [15, 24]. В одном ретроспективном исследовании, сравнивающем ACLET и COMET, частота неоваскуляризации, конъюнктивализации роговицы и улучшения симблефарона была одинаковой между двумя группами [36].

      Nishida et al. указали, что васкуляризацию стромы, наблюдаемую под трансплантатами COMET на периферии роговицы, следует дифференцировать от субэпителиальной неоваскуляризации, которая сопровождает врастание конъюнктивы, которое происходит через несколько месяцев после трансплантации [14]. Периферическая неоваскуляризация, наблюдаемая после COMET, может быть вызвана отсутствием антиангиогенных факторов, таких как рецептор растворимого фактора роста эндотелия сосудов (VEGF), fms-подобная тирозинкиназа-1 (sFlt-1), тканевой ингибитор металлопротеиназы-3 (TIMP). -3) и тромбоспондина-1 (TSP-1) [28, 66, 67] или за счет увеличения фактора роста фибробластов-2 (FGF-2) [68].Первоначальная работа in vitro предполагает, что листы OMEC, полученные в системе культивирования, где клетки фибробластов 3T3 заменены клетками лимбальной ниши в качестве питающего слоя, с меньшей вероятностью вызывают послеоперационную неоваскуляризацию [69].

      Влияние метода подготовки на клинический успех

      Мы обнаружили, что подготовка листов OMEC была относительно стандартизированной; в большинстве исследований использовалась биопсия буккальной ткани, культуральная среда DMEM / F12, AM в качестве субстрата и воздушный подъем во время культивирования. В нескольких исследованиях сравнивались методы культивирования OMEC.Два элемента, которые сравнивались напрямую, — это использование AS по сравнению с FBS в культуральной среде [17] и использование культуры без субстрата по сравнению с AM в качестве субстрата [27]. И AS, и культура без субстрата имеют то преимущество, что сводят к минимуму воздействие на пациента потенциальных загрязнителей. Клинические результаты на данный момент предполагают сравнительную или улучшенную целостность эпителия роговицы и VA при использовании AS и культуры без субстрата по сравнению с использованием FBS и AM. Однако прежде чем делать выводы, необходимы более крупные сравнительные исследования.

      Hirayama et al. сообщили об улучшении успеха (10/16; 62,5%) у пациентов, получавших листы OMEC без субстрата, по сравнению с пациентами, получавшими OMEC, культивированные на AM (6/16; 37,5%) (Таблица 4) [27]. Улучшение BCVA также было лучше в группе без субстратов: 11/16 (68,8%) показали улучшение по сравнению с 7/16 (43,8%). Оба метода привели к стабильной глазной поверхности.

      Добавить комментарий

      Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *